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午夜魔兰: 金币+1 2015-07-27 16:21:53
祝福祝福
11楼2015-07-27 10:21:49
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午夜魔兰

银虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lxzk at 2015-07-27 10:06:09
尿素浓度多少?上样前最好做一下变性,另外上样量不是看浓度,是看总量,我一般上100ng,更多也可以,染色效率也跟序列有关系。

4.2g尿素,2ml TBE,3ml水,5ml 40%丙烯酰胺,再就是90uL 10% aps和8ul TEMED
12楼2015-07-27 14:13:38
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午夜魔兰

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小泓杨 at 2015-07-26 08:54:13
我原先做的时候也是批不出来。但是marker还在那里,它比较抗造,就是它最容易留下印记。电压一般范围就可以,你原先用什么电压,就用什么电压,稍微调调也可以,这个没有讲究。

后来怎么做出来的
13楼2015-07-27 14:15:21
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午夜魔兰: 金币+1 2015-07-27 16:21:56
14楼2015-07-27 14:24:54
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lxzk

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by 午夜魔兰 at 2015-07-27 14:13:38
4.2g尿素,2ml TBE,3ml水,5ml 40%丙烯酰胺,再就是90uL 10% aps和8ul TEMED...

那就是7M尿素,浓度没有什么问题,不过最好后加水补到10ml,直接加3ml水总体积会超过去。那你注意一下上样前变性,再确定一下样品没有降解,应该问题不大。如果实在染不出来,可以考虑化学标记(生物素或者地高辛)或者同位素(磷32)标记,太短的单链DNA有时候就是不好染,你可以把marker也变性一下再跑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
15楼2015-07-27 19:18:36
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Linda66

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
跑的时间太久了,我之前也跑过,十几个碱基的,跑半个小时,就可以了,设置的电流是6mV
16楼2015-10-29 10:08:46
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nomoonsky

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好,你这个可以用于聚丙烯酰胺的marker 是在哪里购买什么型号的? 买回来需要进一步处理吗?还是可以直接添加使用?
17楼2017-11-23 15:11:57
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