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午夜魔兰

银虫 (正式写手)

[交流] DNA凝胶电泳

小弟用的是变性聚丙烯酰胺凝胶分离小于50个碱基的单链DNA,丙烯酰胺浓度20%, 100V电压,跑2-3h。发现DNA条带非常弱,基本看不出碱基,但是marker非常清晰(Low MW DNA Marker,25, 50, 75, 100, 150, 200, 300, 400, 500 bp)。
请问:1,上样的DNA的浓度是多少?开始用60nM没有做条带来,后来用大浓度,大约300nM,还是没有条带,非常弱。
2,需要1500V预电泳吗,我没有进行这一步。
3,我做的实验条件有没有什么问题?
4,50个单链的DNA跑出的条带是对应于marker的25bp还是50bp? 完全互补配对的双链DNA,每条链都是50个碱基,跑出的条带对应的是50bp还是100bp,谢谢!
DNA凝胶电泳
1.jpg
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匿名


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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3楼2015-07-25 20:02:09
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小泓杨

捐助贵宾 (初入文坛)

初出茅庐

★ ★ ★ ★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 19:58:15
午夜魔兰: 金币+3 2015-07-25 20:36:48
预电泳很容易忘。但是,有些事是真理的事就必须做。预电泳的目的就是除去介质中的杂质,如介质为PAG时,还可以清除凝胶中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有剧毒,但是聚丙烯酰胺却没有毒。预电泳是设计在加样前的,估计时间为一小时。
中国的-boy 是一个缺心眼子!
2楼2015-07-25 19:06:05
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午夜魔兰

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小泓杨 at 2015-07-25 19:06:05
预电泳很容易忘。但是,有些事是真理的事就必须做。预电泳的目的就是除去介质中的杂质,如介质为PAG时,还可以清除凝胶中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有剧毒,但是聚丙烯酰胺却没有毒。预电泳是设计在加样前的,估计时间为 ...

电压多少?
4楼2015-07-25 20:36:59
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午夜魔兰

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小泓杨 at 2015-07-25 19:06:05
预电泳很容易忘。但是,有些事是真理的事就必须做。预电泳的目的就是除去介质中的杂质,如介质为PAG时,还可以清除凝胶中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有剧毒,但是聚丙烯酰胺却没有毒。预电泳是设计在加样前的,估计时间为 ...

仅仅是因为没有预电压才出现上述现象吗?为什么marker没影响?
其他步骤有没有影响
5楼2015-07-25 20:37:47
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