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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western blot 求助
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melani1983

铁虫 (初入文坛)

[求助] western blot 求助 已有8人参与

各位大神好！本人小博一名，最近做Western blot 转膜一直不稳定，market有时候也不清晰，转膜条件 230mA 恒流 100min，对应电压大概是110v左右，转膜液配方：配制1L转移缓冲液，需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37g SDS，并加入200ml甲醇，加水至总量1L。提前预冷1个小时以上。附图一张，请大神指导。

western blot 求助
ACTIN-1.jpg
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1楼 2015-07-23 22:25:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:40
胶配的不好吧，不同样品之间有点串了。
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3楼2015-07-24 09:29:18
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melani1983

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by veryonly at 2015-07-24 21:46:27
你这明明是胶的问题，和转膜过程没关系

哦，是胶没凝好还是怎样？谢谢！
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12楼2015-07-25 15:45:47
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普通回帖

探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:34
感觉像是胶的问题。但是Marker也没有跑出来，有点诡异的感觉
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相信什么才会得到什么
2楼2015-07-23 23:09:35
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:49
蛋白分子量很大吗？个人觉得可以不用加SDS。转膜效果不好可能是你的buffer有些问题，可以调整下试试
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4楼2015-07-24 09:44:29
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melani1983

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 探花花 at 2015-07-23 23:09:35
感觉像是胶的问题。但是Marker也没有跑出来，有点诡异的感觉

是胶凝的不好吗？
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5楼2015-07-24 20:04:50
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melani1983

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by a86052 at 2015-07-24 09:44:29
蛋白分子量很大吗？个人觉得可以不用加SDS。转膜效果不好可能是你的buffer有些问题，可以调整下试试

您好！提供的图片分子量大概是42KD。同样的一张膜孵育其他抗体，也有显的还可以的。转膜液不加SDS的话，配方应该是怎样的？谢谢！
western blot 求助-1
SIRT6-3.jpg
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6楼2015-07-24 20:11:47
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veryonly

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
7楼2015-07-24 21:46:27
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yuhp09

铁杆木虫 (正式写手)
转膜液不加SDS，我们这边，感觉是胶没配好

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2015-07-24 22:18:09
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kes7799

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
您試試 1 L 加 tris 3.4g ; glycine 15g 不用加SDS。甲醇170 ml。如果是NC paper不用活化，如果是pvdf先用甲醇活化3 min再進行轉製。
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9楼2015-07-25 08:54:28
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lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主传的是什么的图片？膜接了抗体之后拍的照片么？
那胶呢？转膜之后，胶染色了么？胶什么情况
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10楼2015-07-25 10:19:02
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