【答案】应助回帖

11楼2015-07-25 12:12:35

melani1983

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7楼: Originally posted by veryonly at 2015-07-24 21:46:27
你这明明是胶的问题，和转膜过程没关系

哦，是胶没凝好还是怎样？谢谢！

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12楼2015-07-25 15:45:47

melani1983

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10楼: Originally posted by lavender_li at 2015-07-25 10:19:02
楼主传的是什么的图片？膜接了抗体之后拍的照片么？
那胶呢？转膜之后，胶染色了么？胶什么情况

我传的是膜孵育抗体后的图片，图上比较浓的部分是病毒过表达的条带。转膜之后的胶没有染过。谢谢

13楼2015-07-25 15:48:48

a86052

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7楼: Originally posted by veryonly at 2015-07-24 21:46:27
你这明明是胶的问题，和转膜过程没关系

Marker都转的不清楚的话还是和转膜有关系吧

14楼2015-07-27 08:40:58

lavender_li

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【答案】应助回帖

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13楼: Originally posted by melani1983 at 2015-07-25 15:48:48
我传的是膜孵育抗体后的图片，图上比较浓的部分是病毒过表达的条带。转膜之后的胶没有染过。谢谢...

把胶也染色一下看看是不是胶里面还有大量的蛋白质残留。也许是转膜有问题呢

15楼2015-07-27 10:24:10

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【答案】应助回帖

先把电泳胶染个色鉴定一下是否是PAGE过程中出了问题，然后再向下排查。

16楼2015-07-27 10:27:20

huniu110

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【答案】应助回帖

如果你的蛋白胶不是nondenaturing的，转膜就不需要加sds,一般marker转的不好多半是转膜的问题，我觉得你除了buffer不太对以外，转膜条件也不太好，电压太高，试试低电压，60V,90分钟

17楼2015-07-28 00:29:22

melani1983

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17楼: Originally posted by huniu110 at 2015-07-28 00:29:22
如果你的蛋白胶不是nondenaturing的，转膜就不需要加sds,一般marker转的不好多半是转膜的问题，我觉得你除了buffer不太对以外，转膜条件也不太好，电压太高，试试低电压，60V,90分钟

您好!谢谢您给的建议。您是说变性胶转膜不需要加SDS，是吗？弱弱的问一句SDS起什么作用呢？还有就是低电压不会不影响转膜效率，因为我一般转170KD左右用恒流230mA,相对应电压大约110v左右，再次感谢！

18楼2015-07-28 14:58:07