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木虫 (著名写手)
转莫液我们一直不加sds的，

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2015-07-25 12:12:35
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melani1983

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by veryonly at 2015-07-24 21:46:27
你这明明是胶的问题，和转膜过程没关系

哦，是胶没凝好还是怎样？谢谢！
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12楼2015-07-25 15:45:47
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melani1983

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lavender_li at 2015-07-25 10:19:02
楼主传的是什么的图片？膜接了抗体之后拍的照片么？
那胶呢？转膜之后，胶染色了么？胶什么情况

我传的是膜孵育抗体后的图片，图上比较浓的部分是病毒过表达的条带。转膜之后的胶没有染过。谢谢
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13楼2015-07-25 15:48:48
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a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by veryonly at 2015-07-24 21:46:27
你这明明是胶的问题，和转膜过程没关系

Marker都转的不清楚的话还是和转膜有关系吧
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14楼2015-07-27 08:40:58
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lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by melani1983 at 2015-07-25 15:48:48
我传的是膜孵育抗体后的图片，图上比较浓的部分是病毒过表达的条带。转膜之后的胶没有染过。谢谢...

把胶也染色一下看看是不是胶里面还有大量的蛋白质残留。也许是转膜有问题呢
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15楼2015-07-27 10:24:10
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大叔小笨蛋

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先把电泳胶染个色鉴定一下是否是PAGE过程中出了问题，然后再向下排查。
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16楼2015-07-27 10:27:20
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huniu110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果你的蛋白胶不是nondenaturing的，转膜就不需要加sds,一般marker转的不好多半是转膜的问题，我觉得你除了buffer不太对以外，转膜条件也不太好，电压太高，试试低电压，60V,90分钟
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17楼2015-07-28 00:29:22
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melani1983

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by huniu110 at 2015-07-28 00:29:22
如果你的蛋白胶不是nondenaturing的，转膜就不需要加sds,一般marker转的不好多半是转膜的问题，我觉得你除了buffer不太对以外，转膜条件也不太好，电压太高，试试低电压，60V,90分钟

您好!谢谢您给的建议。您是说变性胶转膜不需要加SDS，是吗？弱弱的问一句SDS起什么作用呢？还有就是低电压不会不影响转膜效率，因为我一般转170KD左右用恒流230mA,相对应电压大约110v左右，再次感谢！
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18楼2015-07-28 14:58:07
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yujun1214

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by melani1983 at 2015-07-24 20:11:47
您好！提供的图片分子量大概是42KD。同样的一张膜孵育其他抗体，也有显的还可以的。转膜液不加SDS的话，配方应该是怎样的？谢谢！

SIRT6-3.jpg
...

我们这转移液是甘氨酸14.4g和Tris 3g 没有SDS，而且一直是用着配制，只有电泳液才加SDS
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19楼2015-07-28 16:12:06
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1510050322

银虫 (初入文坛)
会不会是转膜时膜和胶的位置变化了啊？另外，为什么要提前预冷啊，转膜的时候直接放在冰水中就可以啊。
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20楼2015-07-29 21:47:36
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