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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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melani1983

铁虫 (初入文坛)

[求助] western blot 求助 已有8人参与

各位大神好！本人小博一名，最近做Western blot 转膜一直不稳定，market有时候也不清晰，转膜条件 230mA 恒流 100min，对应电压大概是110v左右，转膜液配方：配制1L转移缓冲液，需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37g SDS，并加入200ml甲醇，加水至总量1L。提前预冷1个小时以上。附图一张，请大神指导。

western blot 求助
ACTIN-1.jpg
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1楼 2015-07-23 22:25:24
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melani1983

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by huniu110 at 2015-07-28 00:29:22
如果你的蛋白胶不是nondenaturing的，转膜就不需要加sds,一般marker转的不好多半是转膜的问题，我觉得你除了buffer不太对以外，转膜条件也不太好，电压太高，试试低电压，60V,90分钟

您好!谢谢您给的建议。您是说变性胶转膜不需要加SDS，是吗？弱弱的问一句SDS起什么作用呢？还有就是低电压不会不影响转膜效率，因为我一般转170KD左右用恒流230mA,相对应电压大约110v左右，再次感谢！
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18楼2015-07-28 14:58:07
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探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:34
感觉像是胶的问题。但是Marker也没有跑出来，有点诡异的感觉
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相信什么才会得到什么
2楼2015-07-23 23:09:35
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:40
胶配的不好吧，不同样品之间有点串了。
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3楼2015-07-24 09:29:18
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:49
蛋白分子量很大吗？个人觉得可以不用加SDS。转膜效果不好可能是你的buffer有些问题，可以调整下试试
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4楼2015-07-24 09:44:29
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