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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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melani1983

铁虫 (初入文坛)

[求助] western blot 求助 已有8人参与

各位大神好!本人小博一名,最近做Western blot 转膜一直不稳定,market有时候也不清晰,转膜条件 230mA 恒流 100min,对应电压大概是110v左右,转膜液配方:配制1L转移缓冲液,需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37g SDS,并加入200ml甲醇,加水至总量1L。提前预冷1个小时以上。附图一张,请大神指导。

western blot 求助
ACTIN-1.jpg
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kes7799

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
您試試 1 L 加 tris 3.4g ; glycine 15g 不用加SDS。甲醇170 ml。如果是NC paper不用活化,如果是pvdf先用甲醇活化3 min再進行轉製。
9楼2015-07-25 08:54:28
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探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:34
感觉像是胶的问题。但是Marker也没有跑出来,有点诡异的感觉
相信什么才会得到什么
2楼2015-07-23 23:09:35
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:40
胶配的不好吧,不同样品之间有点串了。
3楼2015-07-24 09:29:18
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
melani1983(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:21:49
蛋白分子量很大吗?个人觉得可以不用加SDS。转膜效果不好可能是你的buffer有些问题,可以调整下试试
4楼2015-07-24 09:44:29
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