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star97lx

新虫 (小有名气)

[求助] western blot检测出来是原蛋白质的两倍左右大小已有3人参与

请教一下各位大神,最近在用 western blot检测NF-KB的表达的时候,抗体是兔抗鼠p65,检测出来的条带一直是100多KD,想问一下这个是什么情况?NF-KB不是65KD大小么?感觉曝光后的条带大小是65的两倍左右了。感激不尽!
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star97lx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youngfly521 at 2015-07-22 12:05:52
那肯定是杂带了嘛,阳性对照里的目标条带做看吗?

我的实验是分了6个组,空白组,模型组还有各个剂量的用药组,现在是每个组的条带都在一条线上,都显示的是一百多,整张片子有且只有这一条带。因为没有NF-KB这个蛋白,所以暂时做不了阳性组。会不会跟我用的抗体有关系?我用的是国产的抗体。谢谢~
5楼2015-07-23 08:27:26
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youngfly521

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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那肯定是杂带了嘛,阳性对照里的目标条带做看吗?
骚年 奔跑吧
2楼2015-07-22 12:05:52
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foolduke

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
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3楼2015-07-22 12:54:14
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star97lx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by foolduke at 2015-07-22 12:54:14
是不是形成了二聚体了?有可能跑胶的时候二聚体没有打开吧。

我开始也是考虑得形成二聚体了,如果是二聚体应该怎样打开呢?会不会对我的检测结果有影响?
4楼2015-07-23 08:24:02
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

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哥们,NF-KB不是就一个蛋白,整个家族有四五个不同的蛋白。
你确定买的抗体是p65?
NF-kB还有p105, p100呢
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2015-07-23 12:57:09
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长

会不会连marker都有问题,太可怕啦现在做实验,一定得用心做
耻与众草之为伍,何亭亭而独芳!何不为人之所赏兮,深山穷谷委严霜。
7楼2015-07-23 19:26:44
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star97lx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-07-23 12:57:09
哥们,NF-KB不是就一个蛋白,整个家族有四五个不同的蛋白。
你确定买的抗体是p65?
NF-kB还有p105, p100呢

我确定是买的p65哈,只不过是国产的,p65应该只是其中一个亚基,而且不管买p105或者其他难道条带不是应该都在65KD左右么?
8楼2015-08-01 10:42:10
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star97lx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 976592787 at 2015-07-23 19:26:44
会不会连marker都有问题,太可怕啦现在做实验,一定得用心做

我买的是BIO-RAD的marker
应该不会有问题喔
9楼2015-08-01 10:43:58
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

引用回帖:
8楼: Originally posted by star97lx at 2015-07-31 14:42:10
我确定是买的p65哈,只不过是国产的,p65应该只是其中一个亚基,而且不管买p105或者其他难道条带不是应该都在65KD左右么?...

p105的条带在105 kDa
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
10楼2015-08-01 11:08:43
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