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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western blot检测出来是原蛋白质的两倍左右大小
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star97lx

新虫 (小有名气)

[求助] western blot检测出来是原蛋白质的两倍左右大小 已有3人参与

请教一下各位大神，最近在用 western blot检测NF-KB的表达的时候，抗体是兔抗鼠p65，检测出来的条带一直是100多KD，想问一下这个是什么情况？NF-KB不是65KD大小么？感觉曝光后的条带大小是65的两倍左右了。感激不尽！
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1楼 2015-07-22 11:14:28
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star97lx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youngfly521 at 2015-07-22 12:05:52
那肯定是杂带了嘛，阳性对照里的目标条带做看吗？

我的实验是分了6个组，空白组，模型组还有各个剂量的用药组，现在是每个组的条带都在一条线上，都显示的是一百多，整张片子有且只有这一条带。因为没有NF-KB这个蛋白，所以暂时做不了阳性组。会不会跟我用的抗体有关系？我用的是国产的抗体。谢谢~
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5楼2015-07-23 08:27:26
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youngfly521

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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那肯定是杂带了嘛，阳性对照里的目标条带做看吗？
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骚年 奔跑吧
2楼2015-07-22 12:05:52
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foolduke

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2015-07-22 12:54:14
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star97lx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by foolduke at 2015-07-22 12:54:14
是不是形成了二聚体了？有可能跑胶的时候二聚体没有打开吧。

我开始也是考虑得形成二聚体了，如果是二聚体应该怎样打开呢？会不会对我的检测结果有影响？
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4楼2015-07-23 08:24:02
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

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哥们，NF-KB不是就一个蛋白，整个家族有四五个不同的蛋白。
你确定买的抗体是p65?
NF-kB还有p105, p100呢
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2015-07-23 12:57:09
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长
会不会连marker都有问题，太可怕啦现在做实验，一定得用心做
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耻与众草之为伍，何亭亭而独芳！何不为人之所赏兮，深山穷谷委严霜。
7楼2015-07-23 19:26:44
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star97lx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-07-23 12:57:09
哥们，NF-KB不是就一个蛋白，整个家族有四五个不同的蛋白。
你确定买的抗体是p65?
NF-kB还有p105, p100呢

我确定是买的p65哈，只不过是国产的，p65应该只是其中一个亚基，而且不管买p105或者其他难道条带不是应该都在65KD左右么？
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8楼2015-08-01 10:42:10
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star97lx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 976592787 at 2015-07-23 19:26:44
会不会连marker都有问题，太可怕啦现在做实验，一定得用心做

我买的是BIO-RAD的marker
应该不会有问题喔
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9楼2015-08-01 10:43:58
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
8楼: Originally posted by star97lx at 2015-07-31 14:42:10
我确定是买的p65哈，只不过是国产的，p65应该只是其中一个亚基，而且不管买p105或者其他难道条带不是应该都在65KD左右么？...

p105的条带在105 kDa
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
10楼2015-08-01 11:08:43
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