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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 如何在载体上加纯化标签
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)

[交流] 如何在载体上加纯化标签 已有3人参与

急！！！前辈们，新虫求助，我想在要表达的蛋白上加上纯化标签，但之前选的载体上没有，还可以直接在载体上加吗，加在N端还是C端表达量多呀？
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1楼 2015-07-21 09:00:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不太明白你的意思，你做的是原核蛋白表达纯化么？你要加什么标签？His么？标签是要加在目的基因上的，这样纯化才有效果，目的基因<50kd可加N端，>50kd加C端。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-21 09:14:42
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1. 加标签没问题，要自己选定合适的标签，如GST，His，MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说，要自己尝试。一般从N端试起，或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签，要么换载体，如果是His标签，可以设计在引物上，注意对框。
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3楼2015-07-21 09:18:15
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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8楼: Originally posted by 99蜗牛99 at 2015-07-21 11:40:14
您的意思是把标签也合成在目的基因上吗，his标签长吗...

不是，我是说你的蛋白干脆通过化学合成算了。His标签都比你的基因大，这么小的蛋白你以后表达纯化都是麻烦。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
9楼2015-07-21 13:52:34
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 09:14:42
不太明白你的意思，你做的是原核蛋白表达纯化么？你要加什么标签？His么？标签是要加在目的基因上的，这样纯化才有效果，目的基因<50kd可加N端，>50kd加C端。...

蛋白是要在酵母中表达的，现在想加His标签，目的基因长度在1100bp左右，谢谢您。。。
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4楼2015-07-21 09:24:23
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-07-21 09:18:15
1. 加标签没问题，要自己选定合适的标签，如GST，His，MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说，要自己尝试。一般从N端试起，或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签，要么换载体，如果是His标签，可以设计在 ...

之前是放在一种载体上，目的基因前后加了启动子和终止子，但是载体上没有纯化标签，现在想可不可以直接在载体上加呢，因为这两天也一直找酿酒酵母带标签的载体。。。谢谢您。。。
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5楼2015-07-21 09:28:22
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-07-21 09:18:15
1. 加标签没问题，要自己选定合适的标签，如GST，His，MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说，要自己尝试。一般从N端试起，或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签，要么换载体，如果是His标签，可以设计在 ...

您好，请问如果加在C端的话，标签是要放在目的基因3‘端与终止子之间的位置吗？
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6楼2015-07-21 09:34:27
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼: Originally posted by 99蜗牛99 at 2015-07-21 09:24:23
蛋白是要在酵母中表达的，现在想加His标签，目的基因长度在1100bp左右，谢谢您。。。...

才1kd？？？你做合成算了。。。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
7楼2015-07-21 10:36:19
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 10:36:19
才1kd？？？你做合成算了。。。...

您的意思是把标签也合成在目的基因上吗，his标签长吗
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8楼2015-07-21 11:40:14
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 13:52:34
不是，我是说你的蛋白干脆通过化学合成算了。His标签都比你的基因大，这么小的蛋白你以后表达纯化都是麻烦。...

6-his标签是由6个组氨酸组成吗
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10楼2015-07-21 15:48:26
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