24小时热门版块排行榜    

查看: 2765  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

[交流] 如何在载体上加纯化标签 已有3人参与

急!!!前辈们,新虫求助,我想在要表达的蛋白上加上纯化标签,但之前选的载体上没有,还可以直接在载体上加吗,加在N端还是C端表达量多呀?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 09:14:42
不太明白你的意思,你做的是原核蛋白表达纯化么?你要加什么标签?His么?标签是要加在目的基因上的,这样纯化才有效果,目的基因<50kd可加N端,>50kd加C端。...

蛋白是要在酵母中表达的,现在想加His标签,目的基因长度在1100bp左右,谢谢您。。。
4楼2015-07-21 09:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不太明白你的意思,你做的是原核蛋白表达纯化么?你要加什么标签?His么?标签是要加在目的基因上的,这样纯化才有效果,目的基因<50kd可加N端,>50kd加C端。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
2楼2015-07-21 09:14:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1. 加标签没问题,要自己选定合适的标签,如GST,His,MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说,要自己尝试。一般从N端试起,或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签,要么换载体,如果是His标签,可以设计在引物上,注意对框。
3楼2015-07-21 09:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-07-21 09:18:15
1. 加标签没问题,要自己选定合适的标签,如GST,His,MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说,要自己尝试。一般从N端试起,或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签,要么换载体,如果是His标签,可以设计在 ...

之前是放在一种载体上,目的基因前后加了启动子和终止子,但是载体上没有纯化标签,现在想可不可以直接在载体上加呢,因为这两天也一直找酿酒酵母带标签的载体。。。谢谢您。。。
5楼2015-07-21 09:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见