应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 如何在载体上加纯化标签
131/2返回列表12下一页
查看: 2763  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

[交流] 如何在载体上加纯化标签 已有3人参与

急！！！前辈们，新虫求助，我想在要表达的蛋白上加上纯化标签，但之前选的载体上没有，还可以直接在载体上加吗，加在N端还是C端表达量多呀？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-21 09:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不太明白你的意思，你做的是原核蛋白表达纯化么？你要加什么标签？His么？标签是要加在目的基因上的，这样纯化才有效果，目的基因<50kd可加N端，>50kd加C端。
赞一下(1人) 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-21 09:14:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1. 加标签没问题，要自己选定合适的标签，如GST，His，MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说，要自己尝试。一般从N端试起，或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签，要么换载体，如果是His标签，可以设计在引物上，注意对框。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-07-21 09:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 99蜗牛99 at 2015-07-21 11:40:14
您的意思是把标签也合成在目的基因上吗，his标签长吗...

不是，我是说你的蛋白干脆通过化学合成算了。His标签都比你的基因大，这么小的蛋白你以后表达纯化都是麻烦。
赞一下(1人) 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
9楼2015-07-21 13:52:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 09:14:42
不太明白你的意思，你做的是原核蛋白表达纯化么？你要加什么标签？His么？标签是要加在目的基因上的，这样纯化才有效果，目的基因<50kd可加N端，>50kd加C端。...

蛋白是要在酵母中表达的，现在想加His标签，目的基因长度在1100bp左右，谢谢您。。。
赞一下 回复此楼
4楼2015-07-21 09:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-07-21 09:18:15
1. 加标签没问题，要自己选定合适的标签，如GST，His，MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说，要自己尝试。一般从N端试起，或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签，要么换载体，如果是His标签，可以设计在 ...

之前是放在一种载体上，目的基因前后加了启动子和终止子，但是载体上没有纯化标签，现在想可不可以直接在载体上加呢，因为这两天也一直找酿酒酵母带标签的载体。。。谢谢您。。。
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-21 09:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-07-21 09:18:15
1. 加标签没问题，要自己选定合适的标签，如GST，His，MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说，要自己尝试。一般从N端试起，或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签，要么换载体，如果是His标签，可以设计在 ...

您好，请问如果加在C端的话，标签是要放在目的基因3‘端与终止子之间的位置吗？
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-21 09:34:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 99蜗牛99 at 2015-07-21 09:24:23
蛋白是要在酵母中表达的，现在想加His标签，目的基因长度在1100bp左右，谢谢您。。。...

才1kd？？？你做合成算了。。。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
7楼2015-07-21 10:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 10:36:19
才1kd？？？你做合成算了。。。...

您的意思是把标签也合成在目的基因上吗，his标签长吗
赞一下 回复此楼
8楼2015-07-21 11:40:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 13:52:34
不是，我是说你的蛋白干脆通过化学合成算了。His标签都比你的基因大，这么小的蛋白你以后表达纯化都是麻烦。...

6-his标签是由6个组氨酸组成吗
赞一下 回复此楼
10楼2015-07-21 15:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 99蜗牛99 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +4 炎黄贵胄 2026-08-22 5/250 2026-08-24 02:09 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭