24小时热门版块排行榜    

查看: 2785  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

[交流] 如何在载体上加纯化标签 已有3人参与

急!!!前辈们,新虫求助,我想在要表达的蛋白上加上纯化标签,但之前选的载体上没有,还可以直接在载体上加吗,加在N端还是C端表达量多呀?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 10:36:19
才1kd???你做合成算了。。。...

您的意思是把标签也合成在目的基因上吗,his标签长吗
8楼2015-07-21 11:40:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不太明白你的意思,你做的是原核蛋白表达纯化么?你要加什么标签?His么?标签是要加在目的基因上的,这样纯化才有效果,目的基因<50kd可加N端,>50kd加C端。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
2楼2015-07-21 09:14:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1. 加标签没问题,要自己选定合适的标签,如GST,His,MBP。。。。。
2。N端C端效果不好说,要自己尝试。一般从N端试起,或者同时做两个克隆。
3。如果表达载体上没有标签,要么换载体,如果是His标签,可以设计在引物上,注意对框。
3楼2015-07-21 09:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 09:14:42
不太明白你的意思,你做的是原核蛋白表达纯化么?你要加什么标签?His么?标签是要加在目的基因上的,这样纯化才有效果,目的基因<50kd可加N端,>50kd加C端。...

蛋白是要在酵母中表达的,现在想加His标签,目的基因长度在1100bp左右,谢谢您。。。
4楼2015-07-21 09:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 22:24 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见