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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 资料求助 » ELISA标准品稀释问题
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mahui0224

铜虫 (初入文坛)

[求助] ELISA标准品稀释问题已有4人参与

请问：在ELISA实验中，我之前都是把标准品从最高浓度2倍稀释，后来发现曲线拟合不是很好，就改为3倍稀释，例如从2000ng/ml开始，3倍、9倍、27倍、、、、这样稀释，和以前2倍、4倍、8倍、、、、稀释，对同个蛋白定量计算出来的浓度一样吗？最近很纠结这个问题，请高手指教，谢谢！
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追求积极向上的生活
1楼2015-07-16 14:52:19
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duliuhui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
理论上如何稀释的应该没有影响，重点是你设定的线性范围合适就好。
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mahui0224
2楼2015-07-16 15:13:51
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mahui0224

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by duliuhui at 2015-07-16 15:13:51
理论上如何稀释的应该没有影响，重点是你设定的线性范围合适就好。

是的，今天做看个实验，事实证明是没有问题的
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追求积极向上的生活
3楼2015-07-16 16:04:44
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feixuan2012

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般ELISA的标曲会设置8个浓度点,通常至少要有4个浓度点在曲线的对数区域,而且对于样品来说也最好落在该区域,这样测量的批间差异就不会很大.
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4楼2015-07-16 16:14:26
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iupo54

新虫 (小有名气)
这个不用太在意，接近目标浓度就行了
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5楼2015-07-20 08:58:54
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emily_2011

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般2倍或3倍稀释法都是可以的。线性拟合的好坏主要是看浓度设定，与拐点相接近，线性拟合才会好。所以，一般你可以初步设定一下你的ic50，然后先不规律设置6-7个点，初步拟合一下曲线。如0.1、0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/ml, 然后再优化你的稀释比例。

希望对你有帮助
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6楼2015-07-20 10:54:13
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mahui0224

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by duliuhui at 2015-07-16 15:13:51
理论上如何稀释的应该没有影响，重点是你设定的线性范围合适就好。

另外，我想请教一下，细胞因子（例如IL13或IL4）这种太小的分子是不是不适合包板做ELISA？怎么作出来的竞争结果不行？还是因为抗体不行？想问一下就是包被用的抗原分子量大小有要求吗？
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追求积极向上的生活
7楼2015-07-27 14:04:30
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millan23

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

反正ELISA出来的结果误差也还是比较大。你这点稀释根本不是问题。
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以头撞墙，墙破而头不破
8楼2015-07-27 14:32:20
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