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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

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[求助] 求助：关于伏马菌素提取净化和测定过程中的柱子问题。

急求：有谁做过谷物伏马菌素FB1、FB2测定的，（是由串珠镰刀菌 (Fusarium moniliforme Sheld)产生的水溶性代谢产物，是一类由不同的多氢醇和丙三羧酸组成的结构类似的双酯化合物。）我的是用产毒菌株接种玉米样品培养一段时间后，粗提取样品过0.22um滤膜去测定，未稀释和稀释20倍均用LC/MS-MS没有测定出来，标准品加甲醇测得出来，最低可检测到5ppb，但加标时（把标品加到ck样品中，浓度是10ppb）也没有测定出来，测定人员说可能是我的样品杂质太多了，（我自己也不确定，联系公司技术人员说一般来讲菌株接种杂质还是很少的）我现在是想用净化柱除杂，有SAX、SPE柱、免疫亲和柱，不知用哪个比较好；
      查文献说  1）1SAX柱可获得比 SPE C．8柱更好的纯化效果，应用也最为普遍。过柱时样品提取液的 pH是影响纯化效果的最关键因素，必须调节合适，一般要求 pH大于 5．8，并且要严格控制流速不能大于 lml／min，但对大米样品而言，提取液的 pH要求调节到 6．2 虽然 SAX柱在伏马菌素纯化中使用较普遍，但它不能用来纯化水解的伏马菌素，因为水解部分缺少 SAX柱纯化过程中所需的阴离子。
      2 ）SPE C18柱可强烈吸附伏马菌素,由于洗脱较为困难，回收率不够稳定，但该纯化柱可以分离水解的伏马菌素。它已被应用到玉米、牛奶中水解的伏马菌素纯化.。
   3）SPE和 SAX联合柱可同时纯化伏马菌素和水解的伏马菌素。特别是碱处理过的玉米样品提取液中，同时含有伏马菌素和水解的伏马菌素，纯化时首先将样品提取液通过 SAX柱分离伏马菌素，然后再将洗脱液通过 C18,以分离水解的伏马菌素。
   4）免疫亲和柱中含有与伏马菌素结合的抗体，可选择性地吸附伏马菌素，因此，该方法分离纯化效果好．检测灵敏度高，快速，但免疫亲和柱的纯化容量比较小。
   我的样品经过别的方法提取后做ELISA都是在10ppm以上，即10ug/g（提取样品是1g），我查了一下拜发公司（行业比较好的）的免疫亲和柱最大为10ug,因为柱子也比较贵，所以想大家帮我分析下，到底怎么解决，还有以上柱子哪种比较好，在哪买？我问了几家比较好的公司都没有，waters也没有SAX（建议我用那个弱酸性的阴离子交换柱）。但是我看文献测这种毒素的普遍用的是SAX，但是SAX(SAX, Strong anion exchange)强碱性的，毒素是弱酸性的，我很奇怪为何？。如果有好的建议请回复，谢谢大家。有传文件等可发到我的邮箱mengyinweixue@sina.com

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1楼 2014-11-04 22:29:54

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