应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 500KD左右蛋白的WB该怎么做！！！
51/1返回列表
查看: 2945  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yhpzcx

铁虫 (小有名气)

[求助] 500KD左右蛋白的WB该怎么做！！！ 已有3人参与

最近在做500KD大小的WB，做了几次都没有想要的条带？
我的条件是
6%分离胶，4%浓缩胶跑的，大约跑了4h
转膜
0.45PVDF    10%甲醇  0.1%SDS转膜液
一直没有想要的条带
不知论坛里的大神们，有没有做过类似大小的蛋白，给小弟指点迷津
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-14 17:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
500KD大小的SDS PAGE 电泳的脚就很稀，如果6%分离胶，4%浓缩胶跑的，大约跑了4h能够成功的话，恐怕会有不少的蛋白质会穿透凝胶。建议作SDS PAGE 电泳之前先用分子筛充分去除咋蛋白质。

然后在转膜时用事发转膜，用100V恒压400mA，转3-4小时试试看。

但是我觉得如此大的蛋白质做WB检测根部不合适，因该改变试验方法，楼主的实验目的是什么？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2015-07-16 13:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yhpzcx: 金币+5, ★★★很有帮助, 按这条件转了下，可以转上，不过把层析柜弄坏了。。。。 2015-07-21 17:04:29
以前做过一个原核蛋白表达的530kd蛋白，条件跟你的一样，不知道你的转膜时间是多少，我的是300ma，低温过夜，在冷室或层析柜里做。
最后，什么叫没有想要的条带，是什么条带都没有？还是说只是没有目的蛋白的条带？
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-15 09:27:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhpzcx

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-15 09:27:37
以前做过一个原核蛋白表达的530kd蛋白，条件跟你的一样，不知道你的转膜时间是多少，我的是300ma，低温过夜，在冷室或层析柜里做。
最后，什么叫没有想要的条带，是什么条带都没有？还是说只是没有目的蛋白的条带？...

非常感谢回复，我的转膜时间是14v转了18h。
没有目的蛋白的条带
因为是细胞样本，可能表达量不是太高
不知您，最后做出来了么
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-15 10:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yhpzcx at 2015-07-15 10:54:00
非常感谢回复，我的转膜时间是14v转了18h。
没有目的蛋白的条带
因为是细胞样本，可能表达量不是太高
不知您，最后做出来了么...

嗯，重复了3次吧，最后做出来了。你的估计应该是样品的问题，大分子蛋白很容易降解的。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-07-15 16:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +3 轩小宁—— 2026-03-26 3/150 2026-03-26 10:17 by JourneyLucky
[考研] 284求调剂 +3 junqihahaha 2026-03-26 3/150 2026-03-26 10:07 by zyc晨晨晨
[考研] 求调剂 +3 芦lty 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:25 by 芦lty
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭