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yushi1105

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.1
帖子: 6
在线: 3.2小时
虫号: 1184905
注册: 2011-01-06
性别: GG
专业: 间充质干细胞分化

[交流] 紧急请教大家如何使用做chip 已有1人参与

大家好麻烦问一下
我使用的是M2-10B4 cell line 然后做成stable cell line （我表达的蛋白有180kd 有点大）通过表达Flag来进行ChIP 原先打算用sonication机械的方法打断DNA然后做sequencing 本来找到合适的lysis buffer 和时间使得DNA片段已经在500bp左右适合seq了但是发现Flag在长时间的机械力下（保证了低温状态）表达非常弱（通过western blotting验证）请见附件这样不能用来ChIP了
所以我又打算用MNase酶切但是多聚甲醛处理10分钟后的细胞怎么切都切不开（不同浓度的酶和作用时间）我因为是用transcription factor的所以不能不固定时间短了效果也不好（labmate建议的）
所以请问：
1.有没有大虾也遇到过sonication 后 flag tag不表达的状况
2.因为我没有试剂盒（实验室没给买）所以不知道公司的buffer的配方我只想请问一下做MNase之前提取核蛋白的那些溶液配方是什么我可以自己配
紧急紧急

图片1.jpg

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1楼 2013-04-12 05:35:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

六月青予

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 249.2
散金: 438
红花: 15
帖子: 327
在线: 108.4小时
虫号: 1234224
注册: 2011-03-15
性别: MM
专业: 乳腺肿瘤

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

看着像降解了，还是试试Native CHIP吧

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