| 查看: 1286 | 回复: 1 | |||
[交流]
紧急 请教大家如何使用做chip 已有1人参与
|
|
大家好 麻烦问一下 我使用的是M2-10B4 cell line 然后做成stable cell line （我表达的蛋白有180kd 有点大）通过表达Flag来进行ChIP 原先打算用sonication机械的方法打断DNA然后做sequencing 本来找到合适的lysis buffer 和时间 使得DNA片段已经在500bp左右适合seq了 但是发现Flag在长时间的机械力下（保证了低温状态） 表达非常弱（通过western blotting验证）请见附件 这样不能用来ChIP了 所以 我又打算用MNase酶切 但是多聚甲醛处理10分钟后的细胞 怎么切都切不开（不同浓度的酶和作用时间）我因为是用transcription factor的 所以不能不固定 时间短了效果也不好（labmate建议的） 所以 请问： 1.有没有大虾也遇到过sonication 后 flag tag不表达的状况 2.因为我没有试剂盒（实验室没给买）所以不知道公司的buffer的配方 我只想请问一下 做MNase之前提取核蛋白的那些溶液配方是什么 我可以自己配 紧急 紧急  图片1.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有165人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 紧急请教，我这个情况严重么？磁共振影像脑缺血性脱髓鞘病变。
已经有17人回复
- 紧急请教一个初等几何名词！
已经有3人回复
- 散金 紧急请教 申请国家青年科学基金项目 所需的推荐信格式！
已经有10人回复
- 【请教】紧急(针状晶体有没用)
已经有10人回复
2楼2014-11-30 03:42:53
