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紧急 请教大家如何使用做chip 已有1人参与
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大家好 麻烦问一下 我使用的是M2-10B4 cell line 然后做成stable cell line （我表达的蛋白有180kd 有点大）通过表达Flag来进行ChIP 原先打算用sonication机械的方法打断DNA然后做sequencing 本来找到合适的lysis buffer 和时间 使得DNA片段已经在500bp左右适合seq了 但是发现Flag在长时间的机械力下（保证了低温状态） 表达非常弱（通过western blotting验证）请见附件 这样不能用来ChIP了 所以 我又打算用MNase酶切 但是多聚甲醛处理10分钟后的细胞 怎么切都切不开（不同浓度的酶和作用时间）我因为是用transcription factor的 所以不能不固定 时间短了效果也不好（labmate建议的） 所以 请问： 1.有没有大虾也遇到过sonication 后 flag tag不表达的状况 2.因为我没有试剂盒（实验室没给买）所以不知道公司的buffer的配方 我只想请问一下 做MNase之前提取核蛋白的那些溶液配方是什么 我可以自己配 紧急 紧急  图片1.jpg |
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2楼2014-11-30 03:42:53