应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » BiFC或者splitGFP的融合蛋白linker怎么选择？
71/1返回列表
查看: 3618  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

[求助] BiFC或者splitGFP的融合蛋白linker怎么选择？ 已有2人参与

话说，看了别人的文献，再使用splitGFP或者BiFC的时候，也没有太具体说怎么设计linker。。有没有有经验的大虾，指点一下，我的目的基因和半个荧光团之间的linker怎么设计比较好？另外，荧光团应该放在N端还是C端（有莫有影响）？

倒是看见一篇文献，用的splitGFP，把GFP掰成了3份，其中1份弥散表达，2份做融合蛋白，此时他用的linker是30aa的柔性linker。因此有以上问题。额外的，是不是长一些的柔性linker连接就不必纠结连在N端还是C端？但是长一些的linker会不会造成本来相距较远的两个分子出现假阳性？

我的目的蛋白一个1300bp（52kd）一个500bp（19kd）左右。。。哪位神仙狂指点me吧。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2015-11-04 14:56:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kangaroo0513: 金币+8, ★★★很有帮助 2015-11-05 13:18:23
我们用的是富含甘氨酸的linker GGSGGGSG
N端或C端会有影响，这与linker长短不直接相关，应当根据你的目的蛋白具体性质判断。
赞一下(2人) 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2015-11-04 22:49:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kangaroo0513: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-11-05 13:19:06
GGGGS 重复一两次，三次也行
赞一下 回复此楼
此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
3楼2015-11-04 23:52:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-11-04 22:49:36
我们用的是富含甘氨酸的linker GGSGGGSG
N端或C端会有影响，这与linker长短不直接相关，应当根据你的目的蛋白具体性质判断。

能具体说下如何通过蛋白的具体性质判断linker放在哪端么？
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-05 13:18:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-11-04 23:52:08
GGGGS 重复一两次，三次也行

N端融合或者C端融合有虾米影响？某一端可能会失败？
赞一下 回复此楼
5楼2015-11-05 13:59:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷月依依

新虫 (小有名气)
理论上没有影响或很小，可以同时构建N和C端的载体一起进行

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-01-30 00:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-11-05 13:18:54
能具体说下如何通过蛋白的具体性质判断linker放在哪端么？...

这得具体问题具体分析，举例来说蛋白A是膜蛋白，C端跨膜，那么把GFP连在C端可能就有问题，会看不到信号。
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
7楼2016-01-30 21:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kangaroo0513 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +3 NSFC2026我来了 2026-02-28 3/150 2026-03-01 21:41 by autumntian
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +3 wsl111 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:38 by ms629
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 材料化工调剂 +10 今夏不夏 2026-03-01 11/550 2026-03-01 19:49 by 无懈可击111
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 11/550 2026-03-01 19:47 by 无懈可击111
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:11 by 海嵙Y
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 0856调剂 +4 刘梦微 2026-02-28 4/200 2026-03-01 15:35 by 吸一口猫气
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭