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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » BiFC或者splitGFP的融合蛋白linker怎么选择？
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

[求助] BiFC或者splitGFP的融合蛋白linker怎么选择？ 已有2人参与

话说，看了别人的文献，再使用splitGFP或者BiFC的时候，也没有太具体说怎么设计linker。。有没有有经验的大虾，指点一下，我的目的基因和半个荧光团之间的linker怎么设计比较好？另外，荧光团应该放在N端还是C端（有莫有影响）？

倒是看见一篇文献，用的splitGFP，把GFP掰成了3份，其中1份弥散表达，2份做融合蛋白，此时他用的linker是30aa的柔性linker。因此有以上问题。额外的，是不是长一些的柔性linker连接就不必纠结连在N端还是C端？但是长一些的linker会不会造成本来相距较远的两个分子出现假阳性？

我的目的蛋白一个1300bp（52kd）一个500bp（19kd）左右。。。哪位神仙狂指点me吧。。
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1楼 2015-11-04 14:56:08
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kangaroo0513: 金币+8, ★★★很有帮助 2015-11-05 13:18:23
我们用的是富含甘氨酸的linker GGSGGGSG
N端或C端会有影响，这与linker长短不直接相关，应当根据你的目的蛋白具体性质判断。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2015-11-04 22:49:36
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kangaroo0513: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-11-05 13:19:06
GGGGS 重复一两次，三次也行
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
3楼2015-11-04 23:52:08
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-11-04 22:49:36
我们用的是富含甘氨酸的linker GGSGGGSG
N端或C端会有影响，这与linker长短不直接相关，应当根据你的目的蛋白具体性质判断。

能具体说下如何通过蛋白的具体性质判断linker放在哪端么？
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4楼2015-11-05 13:18:54
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-11-04 23:52:08
GGGGS 重复一两次，三次也行

N端融合或者C端融合有虾米影响？某一端可能会失败？
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5楼2015-11-05 13:59:34
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冷月依依

新虫 (小有名气)
理论上没有影响或很小，可以同时构建N和C端的载体一起进行

发自小木虫Android客户端
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6楼2016-01-30 00:54:08
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-11-05 13:18:54
能具体说下如何通过蛋白的具体性质判断linker放在哪端么？...

这得具体问题具体分析，举例来说蛋白A是膜蛋白，C端跨膜，那么把GFP连在C端可能就有问题，会看不到信号。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
7楼2016-01-30 21:54:41
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