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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

[求助] BiFC或者splitGFP的融合蛋白linker怎么选择? 已有2人参与

话说,看了别人的文献,再使用splitGFP或者BiFC的时候,也没有太具体说怎么设计linker。。有没有有经验的大虾,指点一下,我的目的基因和半个荧光团之间的linker怎么设计比较好?另外,荧光团应该放在N端还是C端(有莫有影响)?

倒是看见一篇文献,用的splitGFP,把GFP掰成了3份,其中1份弥散表达,2份做融合蛋白,此时他用的linker是30aa的柔性linker。因此有以上问题。额外的,是不是长一些的柔性linker连接就不必纠结连在N端还是C端?但是长一些的linker会不会造成本来相距较远的两个分子出现假阳性?

我的目的蛋白一个1300bp(52kd)一个500bp(19kd)左右。。。哪位神仙狂指点me吧。。
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kangaroo0513: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-11-05 13:19:06
GGGGS 重复一两次,三次也行
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
3楼2015-11-04 23:52:08
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kangaroo0513: 金币+8, ★★★很有帮助 2015-11-05 13:18:23
我们用的是富含甘氨酸的linker GGSGGGSG
N端或C端会有影响,这与linker长短不直接相关,应当根据你的目的蛋白具体性质判断。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2015-11-04 22:49:36
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-11-04 22:49:36
我们用的是富含甘氨酸的linker GGSGGGSG
N端或C端会有影响,这与linker长短不直接相关,应当根据你的目的蛋白具体性质判断。

能具体说下如何通过蛋白的具体性质判断linker放在哪端么?
4楼2015-11-05 13:18:54
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-11-04 23:52:08
GGGGS 重复一两次,三次也行

N端融合或者C端融合有虾米影响?某一端可能会失败?
5楼2015-11-05 13:59:34
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