| 查看: 1498 | 回复: 4 | |||
[求助]
急，western信号弱 已有3人参与
|
做了目的蛋白-GFP的植株，能够观察到荧光，但是western用GFP抗体（Roche）一直检测不到信号。先想到抗体不好，纯化了GFP的重组蛋白，5倍连续稀释上样，然后用GFP抗体检测，能够看到30ng上样量以上有信号，之后然后把PVDF膜CBB染色，在30ng量也能看到很微弱的条带。这样的western是不是信号太弱了，感觉跟CBB染色没多大区别。后来也检测6His抗体，目的蛋白的多肽抗体都是这个灵敏度。这个western有什么问题啊？为什么信号这么弱，已经试过不同的一抗，二抗浓度组合，还有什么方法提高灵敏度？ 屏幕快照 2015-07-04 12.40.51.png |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 多肽合成技术交流 |
» 猜你喜欢
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有64人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急急急！！western 半干转膜屡次失败，求大神救命！
已经有11人回复
- 急！500kD 蛋白western 求助
已经有17人回复
- Western目的条带处完全无信号（连背景都没），什么情况？
已经有4人回复
- WB结果杂不出目的条带，只有特别亮的非特异性条带，求高手解释原因
已经有10人回复
- Western Blot中蛋白条带信号强弱与上样体积不成正比的可能原因？
已经有3人回复
- 求助EGFP蛋白的western及免疫荧光问题！！！！！急急急！！！！！
已经有4人回复
- 原核表达重组质粒提取
已经有7人回复
- 【求助】紧急求助：western分离胶浓度怎么确定？
已经有10人回复
lidong.0107
铜虫 (小有名气)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 359
- 散金: 25
- 帖子: 84
- 在线: 77.6小时
- 虫号: 879140
- 注册: 2009-10-21
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
2楼2015-07-06 09:16:32
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2015-09-19 20:07:14
4楼2015-09-19 20:45:26
5楼2015-10-31 17:08:41