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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急，western信号弱
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shinnzero

银虫 (小有名气)

[求助] 急，western信号弱 已有3人参与

做了目的蛋白-GFP的植株，能够观察到荧光，但是western用GFP抗体（Roche）一直检测不到信号。先想到抗体不好，纯化了GFP的重组蛋白，5倍连续稀释上样，然后用GFP抗体检测，能够看到30ng上样量以上有信号，之后然后把PVDF膜CBB染色，在30ng量也能看到很微弱的条带。这样的western是不是信号太弱了，感觉跟CBB染色没多大区别。后来也检测6His抗体，目的蛋白的多肽抗体都是这个灵敏度。这个western有什么问题啊？为什么信号这么弱，已经试过不同的一抗，二抗浓度组合，还有什么方法提高灵敏度？

急，western信号弱
屏幕快照 2015-07-04 12.40.51.png
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1楼 2015-07-04 11:41:58
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lidong.0107

铜虫 (小有名气)
加大上样量
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2楼2015-07-06 09:16:32
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MHSW

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2015-09-19 20:07:14
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WDabc

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你6ng也是能看见的。涂的ECL你试过超敏的么

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-09-19 20:45:26
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幽绪西流

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换目的蛋白抗体试试，GFP融合蛋白，GFP检测有时候就是不行。 不知道为什么。
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5楼2015-10-31 17:08:41
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