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yz2007433052

木虫 (职业作家)

[求助] 如何用琼脂糖凝胶电泳区分相同长度的ssDNA和dsDNA 已有3人参与

今天做了一下相同长度dsDNA和ssDNA的分离。如图所示,line1是纯dsDNA,line2是dsDNA+ssDNA(链长均为841 mer或者841 bps),分离条件是:2%的琼脂糖凝胶电泳,200V,30 min。今天没有分出来,我想问一下怎么样才能将800多长度的ssDNA和dsDNA分离开。

如何用琼脂糖凝胶电泳区分相同长度的ssDNA和dsDNA
图片1.jpg
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激浪青春!
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yz2007433052

木虫 (职业作家)

帮帮忙撒
激浪青春!
2楼2015-06-24 21:20:22
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yz2007433052: 金币+33, ★★★很有帮助 2015-06-26 11:26:50
LZ你确定你得到841nt的ssDNA了?你这做的是不对称PCR吧?一般ssDNA的带会出现在dsDNA下方,并伴随杂带和弥散。你这图既无杂带又无明显弥散,很难说你得到ssDNA了。line2明显亮了不少,条带相对单一,先不考虑你点样量的差异,我感觉line2仍是dsDNA.你可以跑个DNA native page验证下,以在你dsDNA上方是否出带为准,我感觉你现在的任务不是分离,而是分析一下你制备ssDNA的方法是否可靠!

[ 发自小木虫客户端 ]
大家相互帮助哈
3楼2015-06-25 02:55:25
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yz2007433052

木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-25 02:55:25
LZ你确定你得到841nt的ssDNA了?你这做的是不对称PCR吧?一般ssDNA的带会出现在dsDNA下方,并伴随杂带和弥散。你这图既无杂带又无明显弥散,很难说你得到ssDNA了。line2明显亮了不少,条带相对单一,先不考虑你点样 ...

谢谢!我尝试用了不对称PCR,但是没有得到理想中的条带,于是改变了策略,首先通过PCR后切胶回收,得到纯度较高的841dsDNA,然后以841dsDNA为模板,只加一条引物进行引物延伸,line1是我纯化出来的dsDNA,line2是我以line的dsDNA为模板进行延伸后所得到的产物。按照道理来说的话,line2里边比line1亮的部分应该肯定是ssDNA吧,因为在进行引物延伸的时候我只加了一条引物
激浪青春!
4楼2015-06-26 11:26:27
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zxdhzau11

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 2015-06-27 22:52:10
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-27 22:52:21
改用8%的胶,2%的胶肯定不能分出来
5楼2015-06-27 22:38:41
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lanlantuo0

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你可以跑两次电泳  在制胶的时候 染色 一个加EB (染双链),另一份加Goldview(染单链)
对比两次电泳图 先看看是条带是dsDNA还是ssDNA再说~
6楼2015-06-28 10:29:29
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baichi121234

禁虫 (职业作家)

本帖内容被屏蔽

7楼2015-06-28 11:04:22
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lanlantuo0

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by baichi121234 at 2015-06-28 11:04:22
EB (染双链),Goldview(染单链)
真的吗
...

差不多吧 反正跑出来的结果是这样的
8楼2015-06-29 08:35:12
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yzq6098273

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lanlantuo0 at 2015-06-28 10:29:29
你可以跑两次电泳  在制胶的时候 染色 一个加EB (染双链),另一份加Goldview(染单链)
对比两次电泳图 先看看是条带是dsDNA还是ssDNA再说~

Goldview也可以染双链DNA
天外飞仙
9楼2020-01-05 15:51:02
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602059625

金虫 (知名作家)

Fractionation of Nucleic Acids into Single-Stranded and Double-Stranded Forms,1996,Nucleic Acids Research
[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
10楼2020-01-09 20:30:43
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