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欣然回忆

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒转染细胞,在G418抗生素存在时细胞可活,但Western测不到目的蛋白???? 已有1人参与

G418筛选浓度为300ug/mL,用的是QIAGEN的Effectene转染试剂,转染后的30天,细胞大量存活,于是用Western检测,但是检测不到目的蛋白,是不是我没有进行挑选单克隆这一个步骤,导致拷贝数不同的细胞都混合起来了,于是得不到转染目的基因成功的细胞呢?可是为什么我的细胞又能在G418里存活?求解??万分感谢!!
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
稳转细胞筛选过程中,挑单克隆这步是不能省的,而且你挑出来的不一定就都是阳性克隆,细胞时间久了也会对G418产生抗性,就有可能形成很多阴性克隆
医学&统计学
2楼2015-06-17 15:05:52
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