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cherryfish

金虫 (小有名气)

[求助] 稳转细胞培养过程中需要加G418吗?

最近刚拿到一株稳转细胞株,WB结果是很好的。但不知道现在的培养过程中是否需要加入g418培养??
希望大侠能指导一下,加入g418的浓度该怎么确定?该什么时候加入?是传代的时候就加呢?还是等细胞贴壁了才能加???
多谢了,万分感谢!!!

(PS。我不知道怎么发金币诶。。。。)
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
cherryfish: 金币+1 2012-12-21 09:11:30
呵呵,我也在做,我是PM放在培养基里面直接传代时候加入的,一直用含有抗生素的培养基培养,WB检测蛮好,就等着做后续试验了
2楼2012-12-20 15:41:56
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onkelhero

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
cherryfish: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 09:14:29
既然是稳转成功的 就不用总加,传4,5代加一次 保持稳定就行了。
3楼2012-12-20 16:37:33
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
cherryfish: 金币+1, 有帮助 2012-12-21 09:14:48
你的细胞本来就是稳转了的,还是你想要通过G418筛选得到能够稳转的细胞呢
万物皆有毒,只要剂量足
4楼2012-12-20 16:45:33
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onkelhero

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

何时加?就是培养时加到培养基里就行了,浓度当然是筛选稳转时的浓度。
5楼2012-12-20 16:53:55
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cherryfish

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-20 15:41:56
呵呵,我也在做,我是PM放在培养基里面直接传代时候加入的,一直用含有抗生素的培养基培养,WB检测蛮好,就等着做后续试验了

是嘛~  谢谢你的回复,那我学习经验了~~
6楼2012-12-21 09:12:15
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cherryfish

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 448935271 at 2012-12-20 16:45:33
你的细胞本来就是稳转了的,还是你想要通过G418筛选得到能够稳转的细胞呢

是害怕质粒没有整合到染色体上,传代的时候又掉出来了。。。
7楼2012-12-21 09:12:58
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cherryfish

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by onkelhero at 2012-12-20 16:53:55
何时加?就是培养时加到培养基里就行了,浓度当然是筛选稳转时的浓度。

谢谢你的回复!! 学习了~
8楼2012-12-21 09:13:35
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那你还得加G418培养几代,等稳定后再撤除
万物皆有毒,只要剂量足
9楼2012-12-21 09:46:41
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wangshuo0102

新虫 (初入文坛)

想问下你们G418你们都是在哪买的啊,我在sigma官网上看到很多种,都蒙了不知道应该用哪种,万分感谢
10楼2015-09-25 18:39:17
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