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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 稳转细胞培养过程中需要加G418吗？
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cherryfish

金虫 (小有名气)

[求助] 稳转细胞培养过程中需要加G418吗？

最近刚拿到一株稳转细胞株，WB结果是很好的。但不知道现在的培养过程中是否需要加入g418培养？？
希望大侠能指导一下，加入g418的浓度该怎么确定？该什么时候加入？是传代的时候就加呢？还是等细胞贴壁了才能加？？？
多谢了，万分感谢！！！

（PS。我不知道怎么发金币诶。。。。）
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1楼 2012-12-20 14:57:57
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cherryfish: 金币+1 2012-12-21 09:11:30
呵呵，我也在做，我是PM放在培养基里面直接传代时候加入的，一直用含有抗生素的培养基培养，WB检测蛮好，就等着做后续试验了
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2楼2012-12-20 15:41:56
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onkelhero

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cherryfish: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 09:14:29
既然是稳转成功的 就不用总加，传4，5代加一次 保持稳定就行了。
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3楼2012-12-20 16:37:33
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cherryfish: 金币+1, ★有帮助 2012-12-21 09:14:48
你的细胞本来就是稳转了的，还是你想要通过G418筛选得到能够稳转的细胞呢
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万物皆有毒，只要剂量足
4楼2012-12-20 16:45:33
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onkelhero

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

何时加？就是培养时加到培养基里就行了，浓度当然是筛选稳转时的浓度。
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5楼2012-12-20 16:53:55
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cherryfish

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-20 15:41:56
呵呵，我也在做，我是PM放在培养基里面直接传代时候加入的，一直用含有抗生素的培养基培养，WB检测蛮好，就等着做后续试验了

是嘛~  谢谢你的回复，那我学习经验了~~
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6楼2012-12-21 09:12:15
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cherryfish

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 448935271 at 2012-12-20 16:45:33
你的细胞本来就是稳转了的，还是你想要通过G418筛选得到能够稳转的细胞呢

是害怕质粒没有整合到染色体上，传代的时候又掉出来了。。。
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7楼2012-12-21 09:12:58
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cherryfish

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by onkelhero at 2012-12-20 16:53:55
何时加？就是培养时加到培养基里就行了，浓度当然是筛选稳转时的浓度。

谢谢你的回复！！ 学习了~
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8楼2012-12-21 09:13:35
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那你还得加G418培养几代，等稳定后再撤除
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万物皆有毒，只要剂量足
9楼2012-12-21 09:46:41
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wangshuo0102

新虫 (初入文坛)
想问下你们G418你们都是在哪买的啊，我在sigma官网上看到很多种，都蒙了不知道应该用哪种，万分感谢
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10楼2015-09-25 18:39:17
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