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cherryfish

金虫 (小有名气)

[求助] 稳转细胞培养过程中需要加G418吗?

最近刚拿到一株稳转细胞株,WB结果是很好的。但不知道现在的培养过程中是否需要加入g418培养??
希望大侠能指导一下,加入g418的浓度该怎么确定?该什么时候加入?是传代的时候就加呢?还是等细胞贴壁了才能加???
多谢了,万分感谢!!!

(PS。我不知道怎么发金币诶。。。。)
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cherryfish

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 448935271 at 2012-12-20 16:45:33
你的细胞本来就是稳转了的,还是你想要通过G418筛选得到能够稳转的细胞呢

是害怕质粒没有整合到染色体上,传代的时候又掉出来了。。。
7楼2012-12-21 09:12:58
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
cherryfish: 金币+1 2012-12-21 09:11:30
呵呵,我也在做,我是PM放在培养基里面直接传代时候加入的,一直用含有抗生素的培养基培养,WB检测蛮好,就等着做后续试验了
2楼2012-12-20 15:41:56
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onkelhero

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
cherryfish: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 09:14:29
既然是稳转成功的 就不用总加,传4,5代加一次 保持稳定就行了。
3楼2012-12-20 16:37:33
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
cherryfish: 金币+1, 有帮助 2012-12-21 09:14:48
你的细胞本来就是稳转了的,还是你想要通过G418筛选得到能够稳转的细胞呢
万物皆有毒,只要剂量足
4楼2012-12-20 16:45:33
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