24小时热门版块排行榜    

查看: 2279  |  回复: 8

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物怎么削平A尾,麻烦说详细点。。。 已有4人参与

用普通Taq酶进行的PCR,不想要3·端的A尾,怎么削平,麻烦说详细点,谢谢了!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用不加A尾的酶扩增不就行了,为什么要搞这么麻烦。
2楼2015-06-12 18:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-06-12 18:04:39
用不加A尾的酶扩增不就行了,为什么要搞这么麻烦。

不加尾的P不出来目的片段
3楼2015-06-12 18:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Daniel_佳: 金币+5, ★★★很有帮助, 嗯,我试试。。 2015-06-16 10:04:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by Daniel_佳 at 2015-06-12 18:09:31
不加尾的P不出来目的片段...

用普通酶扩出片段后,取1微升做模板,然后用高保真酶再扩一次,得到的产物就没有A尾了。
4楼2015-06-12 18:41:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR完成后,向管子里继续加过量的高保真酶(1ul->20ul体系),然后68度孵育30min即可。
5楼2015-06-12 23:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用高保真的酶啊,比如pfu 比如primerstar max
6楼2015-06-14 13:11:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zeroon at 2015-06-14 13:11:34
用高保真的酶啊,比如pfu 比如primerstar max

您能说详细点么。。。。
7楼2015-06-16 10:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-06-12 23:54:15
PCR完成后,向管子里继续加过量的高保真酶(1ul->20ul体系),然后68度孵育30min即可。

过量的高保真酶加多少呢,如果是20ul的体系,加10ul的高保真酶,可以吗?谢谢。。
8楼2015-06-16 10:06:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

364785724

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by Daniel_佳 at 2015-06-16 10:06:38
过量的高保真酶加多少呢,如果是20ul的体系,加10ul的高保真酶,可以吗?谢谢。。...

你老板有钱的话是可以考虑的
9楼2015-07-09 22:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Daniel_佳 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +9 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-09 10:50 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-09 10:18 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 16/800 2026-11-09 06:54 by l48hFd8Nwae2
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 06:39 by l48hFd8Nwae2
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 05:26 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
请填处理意见