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Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物怎么削平A尾，麻烦说详细点。。。 已有4人参与

用普通Taq酶进行的PCR，不想要3·端的A尾，怎么削平，麻烦说详细点，谢谢了！！！
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1楼 2015-06-12 17:52:13
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用不加A尾的酶扩增不就行了，为什么要搞这么麻烦。
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2楼2015-06-12 18:04:39
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Daniel_佳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-06-12 18:04:39
用不加A尾的酶扩增不就行了，为什么要搞这么麻烦。

不加尾的P不出来目的片段
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3楼2015-06-12 18:09:31
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Daniel_佳: 金币+5, ★★★很有帮助, 嗯，我试试。。 2015-06-16 10:04:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by Daniel_佳 at 2015-06-12 18:09:31
不加尾的P不出来目的片段...

用普通酶扩出片段后，取1微升做模板，然后用高保真酶再扩一次，得到的产物就没有A尾了。
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4楼2015-06-12 18:41:27
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR完成后，向管子里继续加过量的高保真酶（1ul->20ul体系），然后68度孵育30min即可。
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5楼2015-06-12 23:54:15
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zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用高保真的酶啊，比如pfu 比如primerstar max
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6楼2015-06-14 13:11:34
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Daniel_佳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zeroon at 2015-06-14 13:11:34
用高保真的酶啊，比如pfu 比如primerstar max

您能说详细点么。。。。
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7楼2015-06-16 10:05:32
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Daniel_佳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-06-12 23:54:15
PCR完成后，向管子里继续加过量的高保真酶（1ul->20ul体系），然后68度孵育30min即可。

过量的高保真酶加多少呢，如果是20ul的体系，加10ul的高保真酶，可以吗？谢谢。。
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8楼2015-06-16 10:06:38
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364785724

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by Daniel_佳 at 2015-06-16 10:06:38
过量的高保真酶加多少呢，如果是20ul的体系，加10ul的高保真酶，可以吗？谢谢。。...

你老板有钱的话是可以考虑的
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9楼2015-07-09 22:16:30
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