应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物怎么削平A尾，麻烦说详细点。。。
91/1返回列表
查看: 2242  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物怎么削平A尾，麻烦说详细点。。。 已有4人参与

用普通Taq酶进行的PCR，不想要3·端的A尾，怎么削平，麻烦说详细点，谢谢了！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-06-12 17:52:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用不加A尾的酶扩增不就行了，为什么要搞这么麻烦。
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-12 18:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-06-12 18:04:39
用不加A尾的酶扩增不就行了，为什么要搞这么麻烦。

不加尾的P不出来目的片段
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-12 18:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Daniel_佳: 金币+5, ★★★很有帮助, 嗯，我试试。。 2015-06-16 10:04:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by Daniel_佳 at 2015-06-12 18:09:31
不加尾的P不出来目的片段...

用普通酶扩出片段后，取1微升做模板，然后用高保真酶再扩一次，得到的产物就没有A尾了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-06-12 18:41:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR完成后，向管子里继续加过量的高保真酶（1ul->20ul体系），然后68度孵育30min即可。
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-12 23:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用高保真的酶啊，比如pfu 比如primerstar max
赞一下 回复此楼
6楼2015-06-14 13:11:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zeroon at 2015-06-14 13:11:34
用高保真的酶啊，比如pfu 比如primerstar max

您能说详细点么。。。。
回复此楼
7楼2015-06-16 10:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-06-12 23:54:15
PCR完成后，向管子里继续加过量的高保真酶（1ul->20ul体系），然后68度孵育30min即可。

过量的高保真酶加多少呢，如果是20ul的体系，加10ul的高保真酶，可以吗？谢谢。。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2015-06-16 10:06:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

364785724

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by Daniel_佳 at 2015-06-16 10:06:38
过量的高保真酶加多少呢，如果是20ul的体系，加10ul的高保真酶，可以吗？谢谢。。...

你老板有钱的话是可以考虑的
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-09 22:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Daniel_佳 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-16 21:26 by MHf40yA0Uhyb
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 yaCh4X3wd045 2026-09-14 3/150 2026-09-16 20:39 by MHf40yA0Uhyb
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-16 19:27 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-16 18:39 by rRvxEj3zorCy
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 23jxep3nCNZb 2026-09-14 5/250 2026-09-16 18:00 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:15 by i3KBRD19ERkG
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 16:24 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 15:48 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-16 07:12 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 04:51 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:35 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-16 03:26 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:26 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-15 14:49 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:34 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭