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小橘子2013

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母做电转时点转杯大小有关系吗 已有1人参与

最近在做酵母电转化,实验室只有0.4mm点转杯,想问一下需要用多少感受态和线性化后的质粒呢?
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简简单单才是真
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-09 16:06:57
如果我用0.4mm的电转杯的话,直接加100ul感受态和10ul质粒的话就可以直接转了吗?会不会太少啊?我要是用2kv-2.5kv的电压会有电火花的呢  有影响吗?...

电火花出现在杯口还是杯内?你的电转参数是如何设置的?你的DNA和感受太是如何制备的?

[ 发自小木虫客户端 ]
大家相互帮助哈
8楼2015-06-09 18:01:15
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

我们一般用0.2的或者0.1的,理论上大点影响也不是很多。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-06-08 19:15:19
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小橘子2013

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-08 19:15:19
我们一般用0.2的或者0.1的,理论上大点影响也不是很多。

我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗
简简单单才是真
3楼2015-06-08 21:09:58
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-08 21:09:58
我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗...

一般我们不会装满,装200微升就够了。。。。没必要装满,至于质粒,一般体积控制在5微升和酵母混合。。。感受态细胞多少其实不太重要,多点也没关系。酵母很好转

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-06-08 21:17:52
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