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小橘子2013

新虫 (小有名气)

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[求助] 酵母做电转时点转杯大小有关系吗已有1人参与

最近在做酵母电转化，实验室只有0.4mm点转杯，想问一下需要用多少感受态和线性化后的质粒呢？

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简简单单才是真

1楼 2015-06-08 16:33:14

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luwei13566

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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1. 0.4mm杯子在相同条件下提供的场强比0.2mm的低一些，更适合大一些的哺乳细胞的转化，酵母也能转，但是不一定能达到满板转化子的效果。如果后期有筛多拷贝要求的话，最好提高电压或者换0.2mm的杯子。
2.感受态按现成的protocol来做，只要保证初始扩培的时候酵母OD在1.0—1.2这个菌体浓度，后期不需要太过关注感受态浓度。
3.DNA最好在5ug—10ug这个程度。体积10ul左右添加到100ul左右感受态里直接加到电极杯中就可以转化了。