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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌 电镜扫描实验请教
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kali509

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌 电镜扫描实验请教 已有1人参与

请问大肠杆菌做SEM 扫描时 重悬溶液是用的什么？
E.coli 在 37℃，24h培养后，用PBS清洗 重悬，然后自然干燥，上机后SEM 发现基本都是盐溶液的结晶，看不到大肠杆菌。需要换成去离子水吗？
请问做过细菌电镜扫描的同学，操作步骤的注意事项。谢谢
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1楼 2015-06-08 16:06:26
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
步骤极其繁琐。。。你的处理过于简单。要切片。。'或者冷冻冻干后看

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-06-08 19:43:23
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PBS洗完，用酒精或者乙酸乙酯从低浓度到高浓度脱水。然后用戊二醛或者多聚甲醛固定。冷冻干燥的话，我觉得没必要，脱水固定玩，自然晾干效果还好一点呢。
你SEM做出来全是白色结晶，是因为PBS是盐溶液啊。。。
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kali509
3楼2015-06-09 10:04:51
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kali509

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-09 10:04:51
PBS洗完，用酒精或者乙酸乙酯从低浓度到高浓度脱水。然后用戊二醛或者多聚甲醛固定。冷冻干燥的话，我觉得没必要，脱水固定玩，自然晾干效果还好一点呢。
你SEM做出来全是白色结晶，是因为PBS是盐溶液啊。。。

十分感谢 我看好多文献都是先用戊二醛后用酒精梯度脱水。 先后顺序有区别吗？
固定的作用主要是为了保持细胞的原始状态吗？
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4楼2015-06-09 13:32:06
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kali509

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-09 10:04:51
PBS洗完，用酒精或者乙酸乙酯从低浓度到高浓度脱水。然后用戊二醛或者多聚甲醛固定。冷冻干燥的话，我觉得没必要，脱水固定玩，自然晾干效果还好一点呢。
你SEM做出来全是白色结晶，是因为PBS是盐溶液啊。。。

2.5% 戊二醛是水溶液还是PBS溶液呢， 如果是PBS盐溶液的话，就应该是先戊二醛固定，然后酒精或者乙酸乙酯脱水？

自然干燥整夜是不是可以了？ 不好意思问题有点多 ；）
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5楼2015-06-09 14:01:53
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
不好意思，说反了。先固定后脱水。。嘿嘿，sorry
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6楼2015-06-11 09:51:47
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kali509

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-11 09:51:47
不好意思，说反了。先固定后脱水。。嘿嘿，sorry

恩恩  谢谢~~戊二醛是水溶液吗， 买来的戊二醛浓度是25%，是用水稀释就好了吗？
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7楼2015-06-11 20:32:58
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耀日光

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-09 10:04:51
PBS洗完，用酒精或者乙酸乙酯从低浓度到高浓度脱水。然后用戊二醛或者多聚甲醛固定。冷冻干燥的话，我觉得没必要，脱水固定玩，自然晾干效果还好一点呢。
你SEM做出来全是白色结晶，是因为PBS是盐溶液啊。。。

同学，请问你做出来的电镜，细菌表面形态怎么样啊，我之前做了电镜也是自然风干的，但是表面出现了很多裂纹，对照组的菌体还破碎了，我想问是不是由于我洗的太多次或者没有冷冻干燥
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8楼2019-08-12 10:08:38
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