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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 如何调整梯度 让保留时间都差不多的分开 我上传图片 帮忙分析 谢谢
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i404944678

金虫 (小有名气)

[求助] 如何调整梯度 让保留时间都差不多的分开 我上传图片 帮忙分析 谢谢

大家先看一下 ，我现在的梯度（见附件1），然后是这16种物质的出峰时间（附件2），A：0.1%甲酸水，B：甲醇，

时间都集中在了4到10min，我想让他们的时间分开一点儿，不要挨得太近，例如：里面有俩个5.9min，俩个5.8min，这样这么能分开一些，还不影响其他的？？？

我想知道调整梯度时的原则，我最初的时候，由于出峰时间集中在浓度为80%-95%B（4-12min）的那个区间，然后我就把这个区间的时间延长了，浓度没变，发现加过不好，我又把80到95区间细致分了下变成80到90，90到95，又发现出峰都集中在了80到90，我就以此类推直到现在这个结果。。。。。。

效果貌似有点儿起色，但是我不满意，希望大神详细指导指导，我对这个梯度的调整无语了，不懂，是不是我的方式错了，不应该这样调整

PS：我进的是混标，浓度1ppm，我这个峰型可以吗？除了图片“保留时间3”的第一个峰外，其他的怎么样，可以直接用了吧？不用重新做了吧。。。。。。。拜谢各位大神

如何调整梯度   让保留时间都差不多的分开  我上传图片  帮忙分析 谢谢
保留时间.JPG


如何调整梯度   让保留时间都差不多的分开  我上传图片  帮忙分析 谢谢-1
保留时间2.JPG


如何调整梯度   让保留时间都差不多的分开  我上传图片  帮忙分析 谢谢-2
保留时间3.JPG


如何调整梯度   让保留时间都差不多的分开  我上传图片  帮忙分析 谢谢-3
保留时间4.JPG


如何调整梯度   让保留时间都差不多的分开  我上传图片  帮忙分析 谢谢-4
保留时间5.JPG


如何调整梯度   让保留时间都差不多的分开  我上传图片  帮忙分析 谢谢-5
附件1.JPG
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岂能尽如人意，但求问心无愧...
1楼 2015-06-04 15:43:19
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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记得你是做MRM，其实不必要完全分开，只要通道之间互不干扰即可。从你的图上看，总的来说还不错，假如降低一下分离的标准，让它们出的更紧凑一些，峰会窄很多，信噪比相应的也会提高。
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i404944678
雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
2楼2015-06-04 19:31:06
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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3楼: Originally posted by i404944678 at 2015-06-04 20:31:47
谢谢你，最后这句话降低分离标准，紧凑一些，信噪比会提高，这个可以详细的讲解一下吗？
...

不谢。
所有这些峰都出在4-10min，这一段梯度比较平缓，一般来说平缓的梯度有利于分离，但是会使峰变宽（极端的例子就是等度，等度的峰往往比梯度要宽）。
如果加快梯度的变化，峰会很快被洗脱出来，分离度可能会下降，也就是更紧凑了。这样的好处是峰会变窄，因为峰面积基本不变，峰变窄了峰高自然会提高，信噪比也就提高了（质谱方法没变噪音不会有太大变化）。

有个小建议是起始的时候最好先走一段等度，根据你的系统的死体积来定，因为死体积的原因梯度变化会有延迟。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
5楼2015-06-04 21:20:31
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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21楼: Originally posted by i404944678 at 2015-06-09 12:23:19
嗯   我优化的差不多了  但是想请教一个问题

当时在优化质谱条件的时候，丰度高的我用做了定量子离子，低的子离子用做了定性的，现在他们的保留时间是一致的，但是峰重合的时候，定性子离子的峰太小了，几乎都被 ...

好像不用重合峰吧，根据保留时间就可以了。如果是定性离子稍微低一点没关系，因为不用它来定量。
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22楼2015-06-09 15:46:52
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archbishop

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30楼: Originally posted by i404944678 at 2015-06-13 15:34:51
嗯嗯，我今天晚上试一下，效果。之后再请教，感谢
...

不谢。
请教谈不上，互相学习
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31楼2015-06-13 16:46:25
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34楼: Originally posted by i404944678 at 2015-06-14 11:42:39
因为据我查到的资料说，由于雌激素的甾体结构较难离子化，故在流动相中加入适量的氨水，以改善该类化合物在负离子模式下的离子化效率。
当然我也可以试试不加氨水，看看效果。还有提高水相的比例，怎么个拖长法， ...

我忘了你是做的液质联用。这类物质最好是用APCI源，ESI虽然也能做但是效果不好，当然，还要以你实际情况为准，只要响应足够就可以。
一水合氨虽然是个弱碱，但是对于色谱柱来说碱性已经很强了，你一定要注意流动相的pH，千万不要超过色谱柱的耐受上限。一般的硅胶基质的色谱柱都在2-8，你可以查看说明书。
如果提高水的比例，峰被洗脱的慢，在柱子里停留的时间长，可能会分的好，拖长梯度就是让梯度变缓。比如0-3 min，30%乙腈，3-13 min，30%-70%乙腈。大概思路就是这样，具体的比例你可以根据情况调节。另外也可以试用其他的溶剂系统，比如把乙腈换成甲醇。
HPLC柱效低，所以这种情况会有很大难度。
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35楼2015-06-14 13:23:13
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archbishop

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36楼: Originally posted by i404944678 at 2015-06-18 21:30:39
嗯  谢谢前段时间的帮助，我现在开始做标曲了，又要请教了，麻烦了
混标14种激素，浓度是0.5、1、2、5、10、20ppb，

问题：1.我查文献看到里面，他们做的浓度是0.01、0.05、0.1、0.5、2.5ppb，但是在它们 ...

1. 线性范围经过了换算，这样直接就可以得到最终浓度。至于怎么算的，这个你得自己从文章里找。
2. 标准曲线一般是每天做一次。当天的数据用当天的标准曲线。
3. 要做方法学的话是要一起做的。
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i404944678 i404944678
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37楼2015-06-18 22:11:14
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43楼: Originally posted by i404944678 at 2015-06-23 16:02:46
嗯  我还想再问一下，我现在没有做方法学实验，也就是没有做样品并计算加标回收率什么的，只是做了混标然后配置了一系列的梯度，做了个标曲，那么我现在可以直接得出LOD或者LOQ吗？
   

还是只有在做了方法学实 ...

说实话，你这个问题我不知道该怎么回答你，方法学验证包括检出限跟定量限。
我觉得你需要找这方面的书来看看，最好是有人现场指导一下。
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i404944678
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44楼2015-06-23 17:20:23
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i404944678

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2楼: Originally posted by archbishop at 2015-06-04 19:31:06
记得你是做MRM，其实不必要完全分开，只要通道之间互不干扰即可。从你的图上看，总的来说还不错，假如降低一下分离的标准，让它们出的更紧凑一些，峰会窄很多，信噪比相应的也会提高。

谢谢你，最后这句话降低分离标准，紧凑一些，信噪比会提高，这个可以详细的讲解一下吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2015-06-04 20:31:47
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金虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by archbishop at 2015-06-04 19:31:06
记得你是做MRM，其实不必要完全分开，只要通道之间互不干扰即可。从你的图上看，总的来说还不错，假如降低一下分离的标准，让它们出的更紧凑一些，峰会窄很多，信噪比相应的也会提高。

是MRM，怎么可以让它们窄一些，变得紧凑？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-06-04 20:35:19
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5楼: Originally posted by archbishop at 2015-06-04 21:20:31
不谢。
所有这些峰都出在4-10min，这一段梯度比较平缓，一般来说平缓的梯度有利于分离，但是会使峰变宽（极端的例子就是等度，等度的峰往往比梯度要宽）。
如果加快梯度的变化，峰会很快被洗脱出来，分离度可能会 ...

嗯，它4分钟后才出峰，刚开始那我就以80的甲醇直接走4分钟吧，以这样的等度应该可以了吧？我试试，一会儿上图，你要有时间帮我看看，这样的效果能不能被接受。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2015-06-04 21:33:25
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6楼: Originally posted by i404944678 at 2015-06-04 21:33:25
嗯，它4分钟后才出峰，刚开始那我就以80的甲醇直接走4分钟吧，以这样的等度应该可以了吧？我试试，一会儿上图，你要有时间帮我看看，这样的效果能不能被接受。
...

刚开始50%吧。80%太高了，而且几乎相当于等度了。
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7楼2015-06-04 21:35:40
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7楼: Originally posted by archbishop at 2015-06-04 21:35:40
刚开始50%吧。80%太高了，而且几乎相当于等度了。...

嗯，现在改成这样了0到4，50的甲醇。4到8，50—80。8到11，80—85。然后后面就是平衡柱子的时间了，回到50了。这样的改变可以不？
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8楼2015-06-04 21:51:13
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8楼: Originally posted by i404944678 at 2015-06-04 21:51:13
嗯，现在改成这样了0到4，50的甲醇。4到8，50—80。8到11，80—85。然后后面就是平衡柱子的时间了，回到50了。这样的改变可以不？...

可以。不过我觉得前面可以短一点，估计你的仪器死体积应该不会超过两分钟。
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9楼2015-06-04 21:54:00
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i404944678

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9楼: Originally posted by archbishop at 2015-06-04 21:54:00
可以。不过我觉得前面可以短一点，估计你的仪器死体积应该不会超过两分钟。...

嗯，我改了，正在走，看看结果，之前没有等度的时候，峰的那个宽度时间0.5分钟，这样走了等度之后会缩短一些是吗？
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10楼2015-06-04 22:02:57
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