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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 不小心被紫外照射后的DNA，有什么补救方法吗？？急求！
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women0517

铜虫 (小有名气)

[交流] 不小心被紫外照射后的DNA，有什么补救方法吗？？急求！ 已有9人参与

之前做的大批量的DNA实验。有次不小心放置在紫外灯下一会儿，自从那次之后，再做pcr跑电泳，均无条带。有时拿几个DNA样本做实验，会有不太明显的条带，但远没有之前的亮度了。
请教一下各位大神，有没有什么办法可以挽救这种现状？？如果我下次提高pcr体系中所加DNA的量，会不会跑出的条带亮度效果会好一些？？
自从被紫外照射后，做的pcr结果很不稳定，有时会有几个条带，但有时基本什么都没有。我的DNA样本量很大，接近100例，所以如果再重新提取的话，要耗费极大的人力和时间。
求大神指点一二！！不胜感激！！
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1楼 2015-06-01 16:54:07
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神的圣诞结

新虫 (小有名气)
继续观察，可能会发现新科学。。。。俺瞎说的。。。。

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9楼2015-06-02 08:24:44
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丝状真君

新虫 (初入文坛)
嘧啶二聚体啊大哥，这真没办法了
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4楼2015-06-01 23:58:14
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普通回帖

晞朔

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-02 23:12:30
紫外照射，是会发生突变的。就算你P出来的带是符合你要求的，序列也可能发生变化。建议重提吧
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2楼2015-06-01 16:59:19
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xmcliulei

银虫 (小有名气)
这个真没办法，建议你重新提取吧~一百个基因组还行吧，我一天就能干50个基因组~加油哦~
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3楼2015-06-01 23:56:58
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-02 23:12:56
1 你的样品是基因组？100来个样品难道都被紫外线照过了？为什么放紫外线下啊？样品是怎么样被紫外线照的？样品是怎样存放的？
2  在紫外线下照射了一会，具体是多长时间？
3  被照射到现在间隔了多长时间？

你的PCR扩增效率降低很可能是嘧啶二聚体导致的，增大模板量会提高一些PCR产物，但是后续是测序构建进化树，异元表达一类的实验这种扩增产物都用不成，关键看你后续试验了，最好重新提了。

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大家相互帮助哈
5楼2015-06-02 01:35:11
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lxzk

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-02 23:13:14
可以使用CPD photolyase和(6-4)PP photolyase 修复两种嘧啶二聚体。不过这两种酶没有商品化，你没有办法搞到的话也可以用NEB的PreCR Repair Mix，可以修复CPD，不能修复(6-4)PP。不过CPD比(6-4)PP要多5到10倍，能把CPD修复了应该对你的实验有帮助。
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6楼2015-06-02 03:18:56
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lxzk

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-06-01 16:59:19
紫外照射，是会发生突变的。就算你P出来的带是符合你要求的，序列也可能发生变化。建议重提吧

紫外产生突变是在细胞内发生的，体外条件下只会产生各种DNA损伤。不过用低保真度或者bybass聚合酶强行复制的话是有可能引入突变的。
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7楼2015-06-02 03:22:18
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rivermeng

银虫 (正式写手)
重做吧，突变是随机的，没法改回去了

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8楼2015-06-02 07:07:00
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fahai

新虫 (小有名气)
用普通光照，细菌经紫外照射诱变后，可以用普通白光照射，DNA具有一定光照修复的能力，可减少突变概率。但你这个纯的DNA不知道可不可以这样做。

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加油
10楼2015-06-02 08:40:47
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