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caichenggu

铁虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母GS115表达,用博来霉素筛选对照和转化都长菌落是什么原因? 已有2人参与

我用毕赤酵母GS115表达蛋白,用化学转化法转化以后,转化和对照都长出了很多菌落,刚开始怀疑是抗生素的问题,现在换了新买的还是老样子,不知道问题出在哪里,各位大神有没有遇见过这种问题啊??
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caichenggu

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-08 13:50:14
zeocin 100ug/ml对照组我试过很多次是可以不长空载的。索莱宝提供的说明书上写的很清楚,50ug/ml就可以把酵母菌筛掉了,所以Za说明书上的100ug/ml用来筛单拷贝是够用了的。
如果对照出现大量菌落。
1.抗生素的问 ...

菌种没有问题,其他应该也没有问题,但是还是长,我估计可能是抗生素有效期有限制
8楼2015-06-08 16:27:12
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-06-08 13:17:36
GS115用遗传霉素不用博来霉素,你确定你没用错?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-06-07 13:46:00
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

你用的是什么载体啊?如果是za系列的话,虽说是博来霉素筛选,但是低浓度的博来霉素确实也能长空载,原因我也不明白。同时设几个浓度梯度,然后以pcr鉴定为准。肉眼观察板子不靠谱。我也正在做这个……

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-06-07 13:49:56
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-06-08 13:18:19
确定终浓度是100ug/ml吗?zeocin是在哪买的?倒平板的时候温度高不高?对照组长出来的菌落颜色如何?确定对照长的是酵母而不是杂菌吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
大家相互帮助哈
4楼2015-06-07 20:09:49
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