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gulpiye212

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请虫友帮我看看淀粉酶活性电泳图

这是初步纯化后的淀粉酶做的Native-page，但是出来的结果拖尾很严重，彩图1左边两个是我的样品，最右边是个MARKER,
看了很多帖说应该使用专门的marker；另外一张最左边也是marker，后面是我的样品，同样也是拖尾严重；
我看发表的文章，基本上活性电泳后应该出来一个水解条带。请各位虫友们帮我分析分析原因，不甚感激！！

请虫友帮我看看淀粉酶活性电泳图
IMG_9765.JPG


请虫友帮我看看淀粉酶活性电泳图-1
5.jpg
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1楼2015-05-21 10:39:58
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
没给出什么信息，还不能完全明白，只能给你看看我是怎么做的。网址如下，我在方法章节写的应该够详细了。
http://journals.plos.org/plosone ... ournal.pone.0121531
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gulpiye212
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2015-05-21 20:43:42
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gulpiye212

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2015-05-21 20:43:42
没给出什么信息，还不能完全明白，只能给你看看我是怎么做的。网址如下，我在方法章节写的应该够详细了。
http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0121531

非常感谢，我看完有问题再与你联系~
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3楼2015-05-26 10:57:02
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gulpiye212

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2015-05-21 20:43:42
没给出什么信息，还不能完全明白，只能给你看看我是怎么做的。网址如下，我在方法章节写的应该够详细了。
http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0121531

你好,我还有一个问题, 跑活性电泳的时候电泳时间如何把握,是需要等溴芬兰跑出去好呢还是??
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4楼2015-05-26 15:58:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
4楼: Originally posted by gulpiye212 at 2015-05-26 15:58:28
你好,我还有一个问题, 跑活性电泳的时候电泳时间如何把握,是需要等溴芬兰跑出去好呢还是??...

这个时间是自己摸索出来的，主要的目的是要达到淀粉酶的条带相互分开，但同时要在这块分离胶中完全呈现，不能跑出去。
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5楼2015-05-26 18:04:06
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gulpiye212

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2015-05-26 18:04:06
这个时间是自己摸索出来的，主要的目的是要达到淀粉酶的条带相互分开，但同时要在这块分离胶中完全呈现，不能跑出去。...

好的,谢谢
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6楼2015-05-27 11:33:25
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gulpiye212

铜虫 (初入文坛)
你好, 按照你的方法我的活性电泳跑的结果还挺理想, 但是可能是蛋白浓度太低了, 用考染后看不到条带,所以我打算多跑几次活性电泳,把活性条带切下来回收后, 浓缩再跑变性电泳确定其分子量. 但是遇到一个问题, 如何回收蛋白能给我个好些的从丙烯酰胺凝胶上回收蛋白吗?谢谢~~
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7楼2015-06-01 10:59:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
7楼: Originally posted by gulpiye212 at 2015-06-01 10:59:55
你好, 按照你的方法我的活性电泳跑的结果还挺理想, 但是可能是蛋白浓度太低了, 用考染后看不到条带,所以我打算多跑几次活性电泳,把活性条带切下来回收后, 浓缩再跑变性电泳确定其分子量. 但是遇到一个问题, 如何回收 ...

你的这个回帖没有引用我的回帖，所以我是现在进来看帖子才知道你又有提问的。还是在我的那个论文里写着有，详细的看这个
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4054503
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8楼2015-06-02 23:23:12
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