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惰惰228

银虫 (小有名气)

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专业: 植物生理与生化

[求助] 提取植物种子中的胆固醇类成分，求指点

最近在提取种子中表达的胆固醇类成分，目标物是22-酮基-26/27羟基胆固醇和藜芦嗪，使用的以下提取步骤：

1. 异丙醇75度预热；
2. 加1.5ml预热的异丙醇至装有种子（约15mg）的玻璃试管中，室温放置15min；
3. 用玻璃棒研磨种子；
4. 加0.75ml氯仿，0.3ml H2O和20ul 100mM标准品内参；
5. 超声10min；
6. 室温震摇1h；
7. 每管涡旋10秒；
8. 1500g离心2min；
9. 将提取物（所有液体）移至新管中；
10. 加2ml氯仿：甲醇（2：1）重复步骤5～9提取一次；
11. 加1ml氯仿：甲醇（2：1）重复步骤5～9提取一次
12. 在装有3次提取物的试管中，加0.5ml 1M KCL；
13. 涡旋，离心，弃上清或小心取出下层溶液至另一新管中；
14. N2干燥后储存于-20度。

这个方法提取出来，22-酮基-26/27羟基胆固醇含量很低，LCMS分析大概是1.0e5的样子，藜芦嗪暂时没得到，也可能是植物并没有合成。

请教一下，如果想提高含量，该在哪些步骤上进行优化呢？重复提取的两步所加提取液是否合适？
偶不是这个专业的，问题可能有很多菜的地方，见笑。

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