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提取植物种子中的胆固醇类成分，求指点
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最近在提取种子中表达的胆固醇类成分，目标物是22-酮基-26/27羟基胆固醇和藜芦嗪，使用的以下提取步骤： 1. 异丙醇75度预热； 2. 加1.5ml预热的异丙醇至装有种子（约15mg）的玻璃试管中，室温放置15min； 3. 用玻璃棒研磨种子； 4. 加0.75ml氯仿，0.3ml H2O和20ul 100mM标准品内参； 5. 超声10min； 6. 室温震摇1h； 7. 每管涡旋10秒； 8. 1500g离心2min； 9. 将提取物（所有液体）移至新管中； 10. 加2ml氯仿：甲醇（2：1）重复步骤5～9提取一次； 11. 加1ml氯仿：甲醇（2：1）重复步骤5～9提取一次 12. 在装有3次提取物的试管中，加0.5ml 1M KCL； 13. 涡旋，离心，弃上清或小心取出下层溶液至另一新管中； 14. N2干燥后储存于-20度。 这个方法提取出来，22-酮基-26/27羟基胆固醇含量很低，LCMS分析大概是1.0e5的样子，藜芦嗪暂时没得到，也可能是植物并没有合成。 请教一下，如果想提高含量，该在哪些步骤上进行优化呢？重复提取的两步所加提取液是否合适？ 偶不是这个专业的，问题可能有很多菜的地方，见笑。 |
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