| 查看: 1558 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
我都哭了~~~~~~~~~~~·5端RACE胶图，求大神指点~~~~~~~~~~~~~~ 已有2人参与
|
||
|
求各位大神指点，这是我简易RACE第一轮PCR的胶图。 体系： 5′RACE Olig(T)-Adaptor 0.5 5′RACE Adaptor 0.5 P1 0.5 模板 1 ddH2O 2.5 高保真酶 5 条件：95°，5min；98°，10s；57°，5s；72°，1min 30s；72°，5min；4°，Forever 循环数：33 参考原理：共设计 4 条引物,P2 、P1 、 5′RACE Olig(T)-Adaptor 和5′RACE Adaptor, 其中 P1 和 P2 是根据已获得中间片段序列而设计的特异性引物, 并且P2 在P1的下游; 5′RACE Olig(T)-Adaptor 和 5′RACE Adaptor 是一对通用引物。首先, 反转录, 用特异性引物 P2代替反转录试剂盒中的Olig(T)在逆转录酶的作用下合成cDNA 的第一链, 用纯化试剂盒将 cDNA纯化; 其次, 在纯化产物 cDNA3′端加一个Poly(A)尾巴。取纯化 cDNA 10 μL, 5×TdT buffer 10 μL,0.1% BSA 5μL, dATP (10 mmol/L) 2.5 μL, TdT 酶1 μL, H2O 21.5 μL, 37℃ 保温 30 min 后 80℃ 终止反应 3 min。产物用 H2O 稀释为1X，10X，100X 后−20℃ 保存。  5端简易RACE.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 扩基因全长出现问题了，求大神指导！！！
已经有4人回复
- 细胞最近总是染菌，帮忙分析一下什么原因？
已经有7人回复
- PCR电泳总是跑成狗骨头的样子，求大神帮忙找找原因哦
已经有26人回复
- 求大神指点一二
已经有10人回复
- 构建载体，目的基因容易发生SNP，但是699bp有10个之多，是不是有问题，太多了吧？
已经有22人回复
- ζ电位与胶体的分散性的关系 ，求大神指点~~~~~~~
已经有10人回复
- 胶回收后再次pcr无目的条带，急，望神人指点。。。
已经有16人回复
9楼2015-09-02 15:25:02
lansong9783
金虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 1479.1
- 红花: 2
- 帖子: 127
- 在线: 53.9小时
- 虫号: 416691
- 注册: 2007-06-30
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
2楼2015-05-11 04:11:32
3楼2015-06-01 11:17:21
4楼2015-06-24 09:12:12
10