应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白150KD左右，不知道表达效果会怎么样，想问一下有什么好的方法来纯化
61/1返回列表
查看: 1388  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

我是丫丫

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白150KD左右，不知道表达效果会怎么样，想问一下有什么好的方法来纯化 已有2人参与

我是做分析实验的，对这一块不是很了解，请大神们给个帮助
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化与检测

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
1楼 2015-05-08 08:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我是丫丫: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-05-20 16:28:35
你的表达蛋白做的是真核表达还是原核表达？原核大分子蛋白表达容易出现降解情况，可以用酵母表达试试。
至于纯化么，还是要看蛋白性质的，我曾经用过分子筛跑大分子蛋白
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-05-08 09:30:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-05-08 09:30:29
你的表达蛋白做的是真核表达还是原核表达？原核大分子蛋白表达容易出现降解情况，可以用酵母表达试试。
至于纯化么，还是要看蛋白性质的，我曾经用过分子筛跑大分子蛋白...

原核表达的！！怎么操作能够避免降解的情况。我的蛋白质粒是有his标签的，打算先过镍柱，分子筛酶用过，但是文献有说，可以详细说一下吗？谢谢老师
赞一下 回复此楼
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
3楼2015-05-20 16:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 我是丫丫 at 2015-05-20 16:28:24
原核表达的！！怎么操作能够避免降解的情况。我的蛋白质粒是有his标签的，打算先过镍柱，分子筛酶用过，但是文献有说，可以详细说一下吗？谢谢老师...

分子筛的那个只是我举得一个例子，因为蛋白表达与纯化还是要看其本身的性质的。你做的亲和纯化实验我就不说步骤了（网上一搜一大把━┳━　━┳━）
主要就是提出几点建议吧，其一，就是你的蛋白在表达前要保证所有使用仪器的洁净，超声时间不宜过长，培养基中可以添加一些抑制剂；其二，蛋白纯化中，可以在低温中进行试验，添加PMSF类的蛋白酶抑制剂，最主要的就是加快实验速度（一定要快，亲测这是最有效的办法）。如果还是有降解的情况，那就从蛋白的基因优化和宿主菌的选择入手吧。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-05-21 10:11:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qc程程
5楼2015-05-21 10:21:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

有HIS标签，建议先镍柱，然后镍柱的洗脱峰直接过分子赛。分子赛简单，你的样品加进去直接用低浓度的缓冲液洗就可以了。这个大的分子量用分子筛效果会很好。镍柱若不吸附了，直接过分子赛，柱子长一些，就分的很好的了，祝顺利。
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-27 13:34:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 我是丫丫 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-02 7/350 2026-03-02 18:46 by caszguilin
[考研] 283求调剂 +4 鹿沫笙 2026-03-02 4/200 2026-03-02 18:41 by caszguilin
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:07 by 2103240126
[考研] 299求调剂 +4 kkcoco25 2026-03-02 4/200 2026-03-02 18:04 by barlinike
[考研] 一志愿东北大学化学314分求调剂 +3 lr1212.. 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:36 by yeahyou
[考研] 一志愿华南理工大学材料与化工326分，求调剂 +3 wujinrui1 2026-02-28 3/150 2026-03-02 16:36 by chuocheng
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[考研] 材料工程274求调剂 +4 Lilithan 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:06 by yuchj
[考研] 284求调剂 +10 天下熯 2026-02-28 11/550 2026-03-02 11:03 by 无际的草原
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭