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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物设计
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惊叹号

金虫 (正式写手)

[求助] 引物设计 已有1人参与

怎么设计质粒构建引物，如何选择内切酶？
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惊叹号

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1楼 2015-05-05 09:37:22
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晞朔

金虫 (正式写手)
你可能要具体描述下你要做什么？这个问题，别人都没办法回答，太大了。
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惊叹号
2楼2015-05-05 10:13:53
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-05 10:31:28
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:07:50
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3楼2015-05-05 10:27:02
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惊叹号

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-05 10:27:02
质粒构建的 引物跟质粒没有关系  跟你想插入到质粒中的基因片段有关系
具体引物设计看看软件操作说明即可，很简单，不然说也说不清楚
酶切位点先看质粒上的多克隆位点，然后分析自己序列中有没有这些酶切位点，只 ...

哪些情况下设计引物时不需要加酶切位点，是不是那种针对载体的内切酶切出的是平末端？
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4楼2015-05-05 10:31:18
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惊叹号

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-05 10:13:53
你可能要具体描述下你要做什么？这个问题，别人都没办法回答，太大了。

我需要构建一个HLA-A2.1的质粒，但是对于扩增全长的引物设计没有经验
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5楼2015-05-05 10:32:36
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cckk_2000

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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惊叹号: 金币+5, ★有帮助 2015-05-05 10:38:34
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:08:02
一、怎么设计质粒？质粒不需要设计，你想插入什么基因的话，需要设计相应的引物，PCR酶切后连接即可。
二、构建引物，这话不合适，引物应该是设计而不是构建。设计引物有很多原则，根据相应文献直接用引物是好办法，不行的话可以用软件设计，完了BLAST一下。
三、如何选择内切酶，根据你选定的质粒选择单一酶切位点，最好是没有星号活性。
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科研炮灰
6楼2015-05-05 10:33:27
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惊叹号

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cckk_2000 at 2015-05-05 10:33:27
一、怎么设计质粒？质粒不需要设计，你想插入什么基因的话，需要设计相应的引物，PCR酶切后连接即可。
二、构建引物，这话不合适，引物应该是设计而不是构建。设计引物有很多原则，根据相应文献直接用引物是好办法 ...

不好意思，可能是输入时失误，应该是设计引物构建质粒，这个一般都是能看懂的。
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7楼2015-05-05 10:38:17
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
惊叹号: 金币+15, ★★★很有帮助 2015-05-05 10:59:02
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惊叹号
8楼2015-05-05 10:46:29
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惊叹号

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-05 10:46:29
如果你想PCR完了直接连T载体借助T载体的酶切位点  酶切后转到你想要的质粒上  此时不需要加酶切位点


平末端的建议不要尝试了 ，不好连  后续的筛选工作量也大...

对这种扩增全长的引物设计我没有什么经验，能否传授一点？
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9楼2015-05-05 10:59:57
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
惊叹号: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-05-05 13:55:44
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10楼2015-05-05 11:05:48
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