【答案】应助回帖

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

惊叹号

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有264人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

1楼2015-05-05 09:37:22

晞朔

金虫 (正式写手)

应助: 201 (大学生)
贵宾: 0.004
金币: 844.3
散金: 147
红花: 13
帖子: 422
在线: 185小时
虫号: 995408
注册: 2010-04-13
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

你可能要具体描述下你要做什么？这个问题，别人都没办法回答，太大了。

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

惊叹号

2楼2015-05-05 10:13:53

nemo88

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-05 10:31:28
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:07:50

本帖内容被屏蔽

3楼2015-05-05 10:27:02

惊叹号

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 476.8
散金: 327
红花: 2
帖子: 326
在线: 49.3小时
虫号: 1432272
注册: 2011-10-08
专业: 临床生物化学检验

引用回帖:

3楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-05 10:27:02
质粒构建的引物跟质粒没有关系跟你想插入到质粒中的基因片段有关系
具体引物设计看看软件操作说明即可，很简单，不然说也说不清楚
酶切位点先看质粒上的多克隆位点，然后分析自己序列中有没有这些酶切位点，只 ...

哪些情况下设计引物时不需要加酶切位点，是不是那种针对载体的内切酶切出的是平末端？

4楼2015-05-05 10:31:18

惊叹号

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 476.8
散金: 327
红花: 2
帖子: 326
在线: 49.3小时
虫号: 1432272
注册: 2011-10-08
专业: 临床生物化学检验

送红花一朵

引用回帖:

2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-05 10:13:53
你可能要具体描述下你要做什么？这个问题，别人都没办法回答，太大了。

我需要构建一个HLA-A2.1的质粒，但是对于扩增全长的引物设计没有经验

5楼2015-05-05 10:32:36

cckk_2000

金虫 (小有名气)

应助: 41 (小学生)
金币: 109.1
红花: 3
帖子: 83
在线: 26.8小时
虫号: 2527948
注册: 2013-07-01
性别: GG
专业: 细胞信号转导

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+5, ★有帮助 2015-05-05 10:38:34
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:08:02

一、怎么设计质粒？质粒不需要设计，你想插入什么基因的话，需要设计相应的引物，PCR酶切后连接即可。
二、构建引物，这话不合适，引物应该是设计而不是构建。设计引物有很多原则，根据相应文献直接用引物是好办法，不行的话可以用软件设计，完了BLAST一下。
三、如何选择内切酶，根据你选定的质粒选择单一酶切位点，最好是没有星号活性。

科研炮灰

6楼2015-05-05 10:33:27

惊叹号

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 476.8
散金: 327
红花: 2
帖子: 326
在线: 49.3小时
虫号: 1432272
注册: 2011-10-08
专业: 临床生物化学检验

引用回帖:

6楼: Originally posted by cckk_2000 at 2015-05-05 10:33:27
一、怎么设计质粒？质粒不需要设计，你想插入什么基因的话，需要设计相应的引物，PCR酶切后连接即可。
二、构建引物，这话不合适，引物应该是设计而不是构建。设计引物有很多原则，根据相应文献直接用引物是好办法 ...

不好意思，可能是输入时失误，应该是设计引物构建质粒，这个一般都是能看懂的。

7楼2015-05-05 10:38:17