应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物设计
191/2返回列表12下一页
查看: 1568  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

惊叹号

金虫 (正式写手)

[求助] 引物设计 已有1人参与

怎么设计质粒构建引物，如何选择内切酶？
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

惊叹号

» 猜你喜欢
1楼 2015-05-05 09:37:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晞朔

金虫 (正式写手)
你可能要具体描述下你要做什么？这个问题，别人都没办法回答，太大了。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

惊叹号
2楼2015-05-05 10:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-05 10:31:28
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:07:50
本帖内容被屏蔽
3楼2015-05-05 10:27:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-05 10:27:02
质粒构建的 引物跟质粒没有关系  跟你想插入到质粒中的基因片段有关系
具体引物设计看看软件操作说明即可，很简单，不然说也说不清楚
酶切位点先看质粒上的多克隆位点，然后分析自己序列中有没有这些酶切位点，只 ...

哪些情况下设计引物时不需要加酶切位点，是不是那种针对载体的内切酶切出的是平末端？
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-05 10:31:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-05 10:13:53
你可能要具体描述下你要做什么？这个问题，别人都没办法回答，太大了。

我需要构建一个HLA-A2.1的质粒，但是对于扩增全长的引物设计没有经验
赞一下 回复此楼
5楼2015-05-05 10:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cckk_2000

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+5, ★有帮助 2015-05-05 10:38:34
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:08:02
一、怎么设计质粒？质粒不需要设计，你想插入什么基因的话，需要设计相应的引物，PCR酶切后连接即可。
二、构建引物，这话不合适，引物应该是设计而不是构建。设计引物有很多原则，根据相应文献直接用引物是好办法，不行的话可以用软件设计，完了BLAST一下。
三、如何选择内切酶，根据你选定的质粒选择单一酶切位点，最好是没有星号活性。
赞一下 回复此楼
科研炮灰
6楼2015-05-05 10:33:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cckk_2000 at 2015-05-05 10:33:27
一、怎么设计质粒？质粒不需要设计，你想插入什么基因的话，需要设计相应的引物，PCR酶切后连接即可。
二、构建引物，这话不合适，引物应该是设计而不是构建。设计引物有很多原则，根据相应文献直接用引物是好办法 ...

不好意思，可能是输入时失误，应该是设计引物构建质粒，这个一般都是能看懂的。
赞一下 回复此楼
7楼2015-05-05 10:38:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
惊叹号: 金币+15, ★★★很有帮助 2015-05-05 10:59:02
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

惊叹号
8楼2015-05-05 10:46:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-05 10:46:29
如果你想PCR完了直接连T载体借助T载体的酶切位点  酶切后转到你想要的质粒上  此时不需要加酶切位点


平末端的建议不要尝试了 ，不好连  后续的筛选工作量也大...

对这种扩增全长的引物设计我没有什么经验，能否传授一点？
赞一下 回复此楼
9楼2015-05-05 10:59:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
惊叹号: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-05-05 13:55:44
本帖内容被屏蔽
10楼2015-05-05 11:05:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 惊叹号 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 04:07 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭