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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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惊叹号

金虫 (正式写手)

[求助] 引物设计 已有1人参与

怎么设计质粒构建引物,如何选择内切酶?
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晞朔

金虫 (正式写手)

你可能要具体描述下你要做什么?这个问题,别人都没办法回答,太大了。

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2楼2015-05-05 10:13:53
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nemo88

禁虫 (小有名气)

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惊叹号: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-05 10:31:28
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3楼2015-05-05 10:27:02
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惊叹号

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-05 10:27:02
质粒构建的 引物跟质粒没有关系  跟你想插入到质粒中的基因片段有关系
具体引物设计看看软件操作说明即可,很简单,不然说也说不清楚
酶切位点先看质粒上的多克隆位点,然后分析自己序列中有没有这些酶切位点,只 ...

哪些情况下设计引物时不需要加酶切位点,是不是那种针对载体的内切酶切出的是平末端?
4楼2015-05-05 10:31:18
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惊叹号

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-05 10:13:53
你可能要具体描述下你要做什么?这个问题,别人都没办法回答,太大了。

我需要构建一个HLA-A2.1的质粒,但是对于扩增全长的引物设计没有经验
5楼2015-05-05 10:32:36
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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惊叹号: 金币+5, 有帮助 2015-05-05 10:38:34
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:08:02
一、怎么设计质粒?质粒不需要设计,你想插入什么基因的话,需要设计相应的引物,PCR酶切后连接即可。
二、构建引物,这话不合适,引物应该是设计而不是构建。设计引物有很多原则,根据相应文献直接用引物是好办法,不行的话可以用软件设计,完了BLAST一下。
三、如何选择内切酶,根据你选定的质粒选择单一酶切位点,最好是没有星号活性。
科研炮灰
6楼2015-05-05 10:33:27
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惊叹号

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cckk_2000 at 2015-05-05 10:33:27
一、怎么设计质粒?质粒不需要设计,你想插入什么基因的话,需要设计相应的引物,PCR酶切后连接即可。
二、构建引物,这话不合适,引物应该是设计而不是构建。设计引物有很多原则,根据相应文献直接用引物是好办法 ...

不好意思,可能是输入时失误,应该是设计引物构建质粒,这个一般都是能看懂的。
7楼2015-05-05 10:38:17
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nemo88

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
惊叹号: 金币+15, ★★★很有帮助 2015-05-05 10:59:02
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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2015-05-05 10:46:29
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惊叹号

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-05 10:46:29
如果你想PCR完了直接连T载体借助T载体的酶切位点  酶切后转到你想要的质粒上  此时不需要加酶切位点


平末端的建议不要尝试了 ,不好连  后续的筛选工作量也大...

对这种扩增全长的引物设计我没有什么经验,能否传授一点?
9楼2015-05-05 10:59:57
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nemo88

禁虫 (小有名气)

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惊叹号: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-05-05 13:55:44
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10楼2015-05-05 11:05:48
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