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nvs0558

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么我的内标突然跑不出来了,并且总引起基线的大漂移呢 已有2人参与

我用的是HPLC-UV,从第6~26分钟之间梯度洗脱,总共跑30分钟。分离的是一堆核苷酸(我想定量的有五种,总共含有至少13种)。借用别人的仪器和柱子。
我一个月前试了方法,当时一切OK。
然后我就忙着做其他课题去了;仪器和柱子别人用着。
现在我打算正式开始方法学考证了。用的流动相还是一个月前配的(当时配了4L)
我要测的东西全都好好的,保留时间也都没变。结果内标的纯品(也是一种核苷酸)怎么都出不来峰
可是每次一跑内标,整个基线就从10分钟左右开始往上翘,翘到比正常的标准品的峰高还要高。。

所以,是我的内标出了什么问题吗?还是我的柱子对内标失效?
急求高手解答!
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jinianwei

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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流动相放的时间太久了吧。也有可能是你的样品的极性和刚开始摸方法时不一样了。或者少进点试试。仪器,或柱子的问题不太可能。
人生需要努力
2楼2015-05-04 17:21:52
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nvs0558

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jinianwei at 2015-05-04 17:21:52
流动相放的时间太久了吧。也有可能是你的样品的极性和刚开始摸方法时不一样了。或者少进点试试。仪器,或柱子的问题不太可能。

所以,流动相究竟可以放多久呢?
理论上,如果是盐溶液或者缓冲液的话,细菌之类的并没有生长环境;化学品也没那么容易降解的。
3楼2015-05-06 13:24:24
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易沐

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by nvs0558 at 2015-05-06 13:24:24
所以,流动相究竟可以放多久呢?
理论上,如果是盐溶液或者缓冲液的话,细菌之类的并没有生长环境;化学品也没那么容易降解的。...

一般最好是现配现用的。盐溶液或者缓冲也不是完全没有细菌生长之类的,更浓度也哟偶关系,还有盐溶液或者缓冲液长时间放置有可能盐析等对柱子不好。
4楼2015-05-06 13:57:01
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木子123abc

新虫 (初入文坛)

检测核苷酸你的那个五种核苷酸标准品是从sigma买的么,我在sigma官网上不卖GMP标准品,有GMP.Na2,你用的GMP标准品是哪种 谢谢

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-12-28 22:42:20
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