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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 求助，测纤维素酶活
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黑奶茶_耶嘿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，测纤维素酶活 已有3人参与

测出来的纤维素酶活是负值，什么原因？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-04-27 22:52:49
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sunim123

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2015-04-27 23:14:35
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xf_芦苇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对照组中有糖，对照组是灭活酶吗？
加热反应后要加到原来的刻度，
我是用DNS测定，不知道是不是一样，希望有用
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3楼2015-04-29 20:12:52
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laplacegsau

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得如果做的标准曲线正常，说明显色剂没问题，否则就是DNS没配好
如果显色剂没问题，那有可能是原因是对照组没有灭酶
或者酶没有和底物反应，有可能是底物有问题，有可能是反应过程的问题，有可能是你要测的酶没有活力。
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4楼2015-04-30 09:41:45
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黑奶茶_耶嘿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xf_芦苇 at 2015-04-29 20:12:52
对照组中有糖，对照组是灭活酶吗？
加热反应后要加到原来的刻度，
我是用DNS测定，不知道是不是一样，希望有用

对的啊，我用的也是灭活酶液做的对照。可是对照本身出来颜色很深。

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5楼2015-05-03 15:25:35
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黑奶茶_耶嘿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by laplacegsau at 2015-04-30 09:41:45
我觉得如果做的标准曲线正常，说明显色剂没问题，否则就是DNS没配好
如果显色剂没问题，那有可能是原因是对照组没有灭酶
或者酶没有和底物反应，有可能是底物有问题，有可能是反应过程的问题，有可能是你要测的酶 ...

还是偶尔能测出来，但值不到0.2

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6楼2015-05-03 15:26:14
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黑奶茶_耶嘿

新虫 (初入文坛)
求帮助啊！！！！

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7楼2015-05-03 15:27:23
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黑奶茶_耶嘿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 黑奶茶_耶嘿 at 2015-05-03 15:27:23
求帮助啊！！！！

再具体描述一下我的困惑：关于显色问题，我一开始做的实验显色都是深紫色的，经常出现负值。我以为是因为沸水浴5分钟并没有完全灭活，后来在酶促反应完成后加了氢氧化钠沸水浴15分，等酶灭活后在加dns显色，颜色确实比以前浅了，但是还是有负值出现。

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8楼2015-05-03 15:31:44
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laplacegsau

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 黑奶茶_耶嘿 at 2015-05-03 15:31:44
再具体描述一下我的困惑：关于显色问题，我一开始做的实验显色都是深紫色的，经常出现负值。我以为是因为沸水浴5分钟并没有完全灭活，后来在酶促反应完成后加了氢氧化钠沸水浴15分，等酶灭活后在加dns显色，颜色确 ...

对照样的灭酶要在酶促反应前，酶促反应后的灭酶是没有意义的。你测酶活的样品是什么？如果里面含有还原糖的话，对照样的颜色深很正常，因为显色剂反映的是还原糖浓度。试验样酶促反应后还原糖浓度会增加，OD的差值实际上就反映的是增加的还原糖浓度。
我觉得你不要纠结于对照样，如果你灭过酶，一般是不会有问题的。考虑一下你的酶促反应过程和测的样品到底有没有酶活。
还有，你用的是DNS么，怎么我记得曾经做的时候DNS是黄色的，不是紫色的
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9楼2015-05-04 14:13:30
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