【答案】应助回帖

hkj710

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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Ustar: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-26 14:34:01

这个蛋白大小属于中间大小，我一般一块10-12%胶100V，一个小时，基本上指示剂到尾部，转膜的话，湿转也是100V，大概300mA，一个小时，绝大部分蛋白都能转印到膜上。只是要注意降温，不要温度太高就可以了

2楼2015-04-25 00:42:13

xh0421

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

Gel running
10% Bio-rad pre-casting gel, 200volts all the way, 40-45min.
or
Hand-casting gel, 4% stacking, 12% resolving, 80volts when in stacking(10-15 min), change to 200volts when you see bromophenol blue in resolving gel (35-40 min). You can get the band as straight as drawing with a ruler.

Transfer
200 volts, 2 hr, 4 degree.
or 80 volts, overnight, 4 degree.

I used to do a lot of WB for a protein at 83kD, if you need, I can send you my protocol.

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Ustar

3楼2015-04-25 01:43:56

Ustar

禁虫 (小有名气)

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4楼2015-04-26 14:34:14

Ustar

禁虫 (小有名气)

送红花一朵

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5楼2015-04-26 14:34:48

fwyou

银虫 (正式写手)

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学习了，其实wb不是很难啊

comeon

6楼2015-04-26 15:45:37

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

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12% 湿转恒流 80mA 2h

7楼2015-04-26 20:39:01

相忘于少年

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by xh0421 at 2015-04-25 01:43:56
Gel running
10% Bio-rad pre-casting gel, 200volts all the way, 40-45min.
or
Hand-casting gel, 4% stacking, 12% resolving, 80volts when in stacking(10-15 min), change to 200volts when you see brom ...

浓缩胶的配比你可说说吗？谢谢！

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修和无人见，存心有天知。

8楼2015-04-26 23:18:53

Ustar

禁虫 (小有名气)

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9楼2015-04-27 08:30:37

Ustar

禁虫 (小有名气)

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10楼2015-04-27 08:36:08