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求助！蛋白质切掉GST tag后沉了已有1人参与
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| 我在BL21里表达GST-RASSF1A ，谷胱甘肽洗脱后，酶切切掉GST，蛋白就沉了（蛋白PI 9.25），是buffer不对吗？如何筛选合适的buffer？另外GST-RASSF1A挂在beads上，不用谷胱甘肽洗脱，直接加酶切掉GST，但只elute下少量RASSF1A，大部分还在beads上，如何防止蛋白切掉tag后沉在beads上？如果沉了，怎样洗下来？同样蛋白带His tag，也是相似问题，250mM咪唑只洗脱了一小半蛋白，大部分还在Ni beads上，EDTA也洗不下来（死在beads上的蛋白不做希望），如何避免蛋白沉在Ni beads上？ |
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