应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求助！蛋白质切掉GST tag后沉了
51/1返回列表
查看: 1614  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

haozy87

金虫 (小有名气)

[求助] 求助！蛋白质切掉GST tag后沉了 已有1人参与

我在BL21里表达GST-RASSF1A ，谷胱甘肽洗脱后，酶切切掉GST，蛋白就沉了（蛋白PI 9.25），是buffer不对吗？如何筛选合适的buffer？另外GST-RASSF1A挂在beads上，不用谷胱甘肽洗脱，直接加酶切掉GST，但只elute下少量RASSF1A，大部分还在beads上，如何防止蛋白切掉tag后沉在beads上？如果沉了，怎样洗下来？同样蛋白带His tag，也是相似问题，250mM咪唑只洗脱了一小半蛋白，大部分还在Ni beads上，EDTA也洗不下来（死在beads上的蛋白不做希望），如何避免蛋白沉在Ni beads上？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
不忘初心
1楼 2015-04-17 23:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlbiosci

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by haozy87 at 2015-04-20 12:16:44
Beads 确实不行了，问题是新beads效果也没提升多少。现在只能再换载体，换表达系统了...

最近做的蛋白都是包涵体，郁闷

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-20 17:55:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

mlbiosci

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的buffer的ph多少？调的离pi远一点试试。按照beeds的说明书操作问题应该不大的。 你的平衡buffer加低浓度咪唑了吗？上样之前也用此含有低浓度咪唑的buffer平衡柱子试试。
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-19 14:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haozy87

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-04-19 14:16:53
你的buffer的ph多少？调的离pi远一点试试。按照beeds的说明书操作问题应该不大的。 你的平衡buffer加低浓度咪唑了吗？上样之前也用此含有低浓度咪唑的buffer平衡柱子试试。

BUffer pH 7.4和7.0都试过，平衡buffer咪唑浓度20mM，beads肯定是要先平衡的。
赞一下 回复此楼
不忘初心
3楼2015-04-19 16:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlbiosci

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by haozy87 at 2015-04-19 16:48:11
BUffer pH 7.4和7.0都试过，平衡buffer咪唑浓度20mM，beads肯定是要先平衡的。...

我常用的也是这个条件，出现过beeds聚集成整体的情况，吹散后呈大颗粒状，高浓度咪唑洗脱也没改善，师兄说是beeds被破坏了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-19 20:36:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 315分求调剂 +3 26考研上岸版26 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:46 by 王笑宇一定是研�
[考研] 275求调剂 +4 Micky11223 2026-03-25 6/300 2026-03-26 08:52 by 提出方法的提出�
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +10 RichLi_ 2026-03-25 10/500 2026-03-26 02:17 by BruceLiu320
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭