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求助!蛋白质切掉GST tag后沉了 已有1人参与
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| 我在BL21里表达GST-RASSF1A ,谷胱甘肽洗脱后,酶切切掉GST,蛋白就沉了(蛋白PI 9.25),是buffer不对吗?如何筛选合适的buffer?另外GST-RASSF1A挂在beads上,不用谷胱甘肽洗脱,直接加酶切掉GST,但只elute下少量RASSF1A,大部分还在beads上,如何防止蛋白切掉tag后沉在beads上?如果沉了,怎样洗下来?同样蛋白带His tag,也是相似问题,250mM咪唑只洗脱了一小半蛋白,大部分还在Ni beads上,EDTA也洗不下来(死在beads上的蛋白不做希望),如何避免蛋白沉在Ni beads上? |
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