应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 启动子与质粒正反向连接
52/1返回列表
查看: 3417  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

永恒_99

金虫 (正式写手)

[求助] 启动子与质粒正反向连接 已有5人参与

本人想将5个基因的启动子分别与特定的质粒正、反向连接，如何可以简便的操作。先合成带有已单酶切后序列的启动子片段，正反向连接质粒。如何实现保证正反向都能连接，而且怎么验证呢。
假如这种方法行不通，那么另一种基本的方法，就是设计带有双酶切位点的引物，PCR扩增片段，双酶切连接。反方向是交换上下游引物酶切位点。请问这么设想对吗。谢谢。本人初涉微生物领域。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-04-11 21:57:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

condy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 永恒_99 at 2015-04-13 08:43:56
假如DNA片段合成呢，可以直接省去第一个质粒，与最后一个质粒连接，转化大肠，再转化到目的菌株中吗？顺便问一下，启动子片段多大比较合适，你知道合成基因多少钱吗。谢谢。...

DNA合成也需要模板啊。不同的基因启动子片段长度不同，一般100bp左右吧。碱基合成大概6毛钱一个。你可以找一篇基因克隆相关的文档看看。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2015-04-13 12:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

biosci

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
感谢参与，应助指数 +1
永恒_99: 金币+1, ★有帮助 2015-04-12 14:51:11
无缝克隆试剂，一步搞定，妥妥的

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-04-12 08:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

东走西步

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
永恒_99: 金币+1, ★有帮助 2015-04-12 14:51:22
可以尝试融合PCR的方法，应该比酶切酶连快一点。具体方法参照张一恒的simple cloning
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-04-12 11:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永恒_99

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 东走西步 at 2015-04-12 11:00:08
可以尝试融合PCR的方法，应该比酶切酶连快一点。具体方法参照张一恒的simple cloning

你好，非常感谢，从哪里能下载到张一恒的simple cloning，谢谢。
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-12 14:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭