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kedaxyn金虫 (正式写手)
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过反相，一堆峰，都挤到一起了，肿么办？求指点 已有6人参与
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第一次尝试分水层，先用大孔树脂过，然后上了一根大硅胶柱砍段。今天将10%甲醇流分段（大概10g）用反相材料拌样，上了反相。结果出峰一个挨一个特别紧凑，实在不知道该怎么办。之前做分离纯化用的都是硅胶凝胶，实验室新买了一台中压纯化制备仪(天津博纳艾杰尔的），老师交代以后要多用，可是完全不知道从哪下手。光接溶剂用了一堆瓶子，蒸含水溶剂也是个棘手的问题。 感觉前途无亮，恳请大家给予指导，提出建议。自己脑袋不够灵光，实验室又木有师兄师姐，突然都不知道怎么下手。掰着书本看，说是甲醇 比例逐渐增大，可是每次增大多少，每次接多少，一头雾水的感觉。附图两张，一张是我点板的情况，前两个板是氯仿甲醇9比1展开的，第三个板是氯仿甲醇8比2展开的；第二张图是制备仪上显示的峰，看着都要崩溃的感觉。 问题1、过反相一般溶剂比例每次增加多少，大概多少一接？ 2、对于峰很多很密，怎么处理，做到每个峰都接太不现实。但是又没有很特征的峰，遇到这样的情况该怎么办？ 3、书上说水层的东西用正相硅胶分，会死吸附很多，所以要多结合反相和凝胶。对于极性较小的组分，用正相硅胶分应该问题不大吧？ 4、如果没有冷冻装置，收集的含水比例较大的溶剂相一般怎么蒸呢？ 望做植化的同学给予宝贵建议，小女子感激不尽！   |
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答1：每次增加可以从10%-20%-30%慢慢增加每次10%，因不知道你要的是哪一组份，所以每个比例的量现在不好说。你可以先按3-5个柱体的量进行洗脱，用TLC监控看结果再调整。 答2：一般峰很密的话，先可以用降低洗脱液比例的办法，或者可以尝试选择中间比例一直洗脱，但收集每份的量要减少，再TLC监控看结果。 答3：这个对你的东西不了解，说不清。 答4：有一个办法可以用，将你需要的收集液先加50%水稀释，然后加到洗干净的反相柱上，待加完后，有条件真空抽干，再用纯甲醇洗下，再去旋蒸蒸干。如果有物质在稀释后直接析出，可以试试用合适的有机溶剂萃取。 |
9楼2015-04-09 15:27:28
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1: 梯度的增加主要是20-40-60-80-100这样，每一个梯度一段时间；每一次收集我个人觉得收集能收集的最大量； 2：中亚主要是分段，用在浸膏过完第一次大柱子之后就上中亚，没有特征峰不代表没东西，还是以TLC为准； 3：水层用正相确实相对较少，凝胶，MCI多了一些比例；对于小极性化合物适用HPLC的果断用之，不要考虑正相；我看了你的极性，氯仿甲醇9:1，大致是氯仿丙酮3:1，极性还是不大的； 4：这个问题只有找老板商量，没有冷凝效率会很低。 PS: 你的板我看了，如果都是这样，我觉得可以放弃了。 |
10楼2015-04-09 15:56:49
hydros
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老板让多用，不一定听他的。要根据实际情况取舍，个人觉得粗分阶段还是不用中压好。到后期可以用中压，一切以工作便利为宗旨，最多做点样子给老板看。硅胶板能展起来的，在柱子上不会死吸附很多。大极性的上反相效果不一定好，不易保留。可以试试MCI，国产的很便宜，效果跟进口相当。回收水的话没有设备只能用旋蒸，偶尔往里面加点甲醇，回收也挺快。 梯度洗脱每次增加10-20% [ 发自小木虫客户端 ] |
12楼2015-04-09 16:12:38
kedaxyn
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