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开心小迷糊

金虫 (小有名气)

[求助] 菌株的保藏与活化

请教一下各位大神,我用甘油纸片法保藏了大肠杆菌和绿脓杆菌,在LB平板上活化时为什么长不出来?各位大神都是怎么活化保藏菌株的啊?急求啊!
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物


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9楼: Originally posted by 开心小迷糊 at 2015-04-15 16:57:00
我觉得换个方法试试,用新的菌株新的方法再保藏吧,你们都是用什么方法保存的?...

绿脓杆菌保藏条件比较奇怪的,不能四度保藏,会自溶的。。养好的菌要常温保藏,或者-20度甘油冻存
14楼2015-04-15 17:07:22
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普通回帖

王贤卓

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2015-04-13 16:49:03
开心小迷糊: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-15 16:54:23
保存时间多久,是否菌已经死亡了?  如果时间过长,你直接用液体培养,再平板划线i
2楼2015-04-07 11:57:14
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物


【答案】应助回帖

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先液体培养看看吧,还是不长,菌可能已经死了,换新的菌种吧!
3楼2015-04-07 13:54:23
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金圣功成

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2015-04-13 16:49:18
开心小迷糊: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-15 17:09:10
15%-30%的甘油总浓度保种啊,我常用25%的,也有用50%的也没问题,你这是常见菌不会那么苛刻的,还有如果转了质粒的菌,甘油别太高。楼主先液体摇菌做个鉴定后再重新保种吧。祝顺利
生活不可能像你想象得那么好,但也不会像你想象得那么糟。我觉得人的脆弱和坚强都超乎自己的想象。有时,我可能脆弱得一句话就泪流满面,有时,也发现自己咬着牙
4楼2015-04-08 10:58:54
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金圣功成

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 金圣功成 at 2015-04-08 10:58:54
15%-30%的甘油总浓度保种啊,我常用25%的,也有用50%的也没问题,你这是常见菌不会那么苛刻的,还有如果转了质粒的菌,甘油别太高。楼主先液体摇菌做个鉴定后再重新保种吧。祝顺利

甘油终浓度
生活不可能像你想象得那么好,但也不会像你想象得那么糟。我觉得人的脆弱和坚强都超乎自己的想象。有时,我可能脆弱得一句话就泪流满面,有时,也发现自己咬着牙
5楼2015-04-08 10:59:25
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紫薯培根

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先用液体培养基(如营养肉汤培养基)进行复活,然后再划线分离试试

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-04-10 22:09:00
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你是把菌放到-80℃吗?可能是放到-20℃,存放时间过长,导致菌体死亡
相信自己,永不言弃
7楼2015-04-10 23:31:32
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开心小迷糊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 王贤卓 at 2015-04-07 11:57:14
保存时间多久,是否菌已经死亡了?  如果时间过长,你直接用液体培养,再平板划线i

保存不到一个月,其他的菌都能长出来,就绿脓长不出来。我用液体培养了,它也不长,好奇怪
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8楼2015-04-15 16:55:55
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开心小迷糊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2015-04-07 13:54:23
先液体培养看看吧,还是不长,菌可能已经死了,换新的菌种吧!

我觉得换个方法试试,用新的菌株新的方法再保藏吧,你们都是用什么方法保存的?
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9楼2015-04-15 16:57:00
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开心小迷糊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 金圣功成 at 2015-04-08 10:58:54
15%-30%的甘油总浓度保种啊,我常用25%的,也有用50%的也没问题,你这是常见菌不会那么苛刻的,还有如果转了质粒的菌,甘油别太高。楼主先液体摇菌做个鉴定后再重新保种吧。祝顺利

25%的甘油和水吗?我准备用50%的甘油保藏试试,看接到液体里能不能长,十分感谢
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10楼2015-04-15 16:59:17
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