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残-影

金虫 (小有名气)

[求助] 药材含量测定时两类成分含量差别很大,该如何解决? 已有1人参与

如题,目前在用UPLC-Q/TOF 做一味中药的含量测定,其中有两个成分含量特别高,按照我的进样浓度可达250μg/ml,而另外一类黄酮类物质含量很低,只有0.02μg/ml的样子,所以做标曲时候就很纠结,我如果迁就含量高的稀释样品,那么含量低的就检测不到了,如果迁就含量低的,则含量高的物质无法包含在标曲内(最大进样浓度在300μg/ml的样子),有没有人遇到过同样的情况呢?

PS:     用TOF做定量确实不如TQ,我做样品时候发现重复性很差,同一样品同一个物质连续三针RSD可以达到18%有的更高,可是目前现有条件只能用TOF,有没有做过的高人,可以传授给我一些经验?
请各位高人赐教!

[ Last edited by archbishop on 2015-4-4 at 11:48 ]
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不才在下本姑娘这厢有礼了
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

不同的物质标准曲线可以用不同的浓度范围,比如:
A: 2 ng/mL, 5 ng/mL, 10 ng/mL, 20 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL,
B: 10 μg/mL, 25 μg/mL, 50 μg/mL, 100 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL,
确定好一个储备液的浓度向下稀释就可以了。
TOF就是不准,因为它分辨率很高,分辨率和准确度是负相关的。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
2楼2015-04-04 11:52:56
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残-影

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-04 11:52:56
不同的物质标准曲线可以用不同的浓度范围,比如:
A: 2 ng/mL, 5 ng/mL, 10 ng/mL, 20 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL,
B: 10 μg/mL, 25 μg/mL, 50 μg/mL, 100 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL,
确定好一个储备 ...

我知道标曲浓度可以在不同范围,可是就像你说的B的浓度达到500μg/mlUPLC的柱子就会过载,MS也不能进那么高的浓度,怎么办呢?
不才在下本姑娘这厢有礼了
3楼2015-04-04 14:20:43
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 残-影 at 2015-04-04 14:20:43
我知道标曲浓度可以在不同范围,可是就像你说的B的浓度达到500μg/mlUPLC的柱子就会过载,MS也不能进那么高的浓度,怎么办呢?...

选用响应更低的离子或碎片离子。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
4楼2015-04-04 14:25:57
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 残-影 at 2015-04-04 14:20:43
我知道标曲浓度可以在不同范围,可是就像你说的B的浓度达到500μg/mlUPLC的柱子就会过载,MS也不能进那么高的浓度,怎么办呢?...

上面说的不恰当,不适用这种情况。因为浓度比较高需要稀释,你只能把它们分开测定。

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雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
5楼2015-04-04 14:32:50
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残-影

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-04 14:32:50
上面说的不恰当,不适用这种情况。因为浓度比较高需要稀释,你只能把它们分开测定。...

也就是说我测定同一个药材不同成分,还需要制备两份不同浓度的样品?可以这样做么?没见别人这样做过啊。
不才在下本姑娘这厢有礼了
6楼2015-04-04 15:33:15
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by 残-影 at 2015-04-04 15:33:15
也就是说我测定同一个药材不同成分,还需要制备两份不同浓度的样品?可以这样做么?没见别人这样做过啊。...

当然可以。别人没做过可能有很多原因,比如测定两次成本太高,如果有方法学验证成本更高,或者根据实验需求没必要测定浓度低的成分等。

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雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
7楼2015-04-04 17:09:49
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old_yang

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
残-影: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢,那么方法学考察也是要做两套么? 2015-04-05 21:54:20
只能分别定量了,处理两个样品,一个原始浓度,定量低浓度的;一个稀释100倍,测定浓度高的;分别计算。
8楼2015-04-05 16:41:28
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残-影

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-04 17:09:49
当然可以。别人没做过可能有很多原因,比如测定两次成本太高,如果有方法学验证成本更高,或者根据实验需求没必要测定浓度低的成分等。...

非常感谢您的帮助!
不才在下本姑娘这厢有礼了
9楼2015-04-05 21:53:27
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